همسانه سازی و بررسی خصوصیات آلفا آمیلاز سرمادوست از باکتری بومی Exiguobacterium sp.SH3

آنزیمهای باکتریایی کاربرد گستردهای در صنعت دارند. در میان این آنزیمها، آلفا آمیلازها در صنایعای مانند داروسازی، نساجی ، موادغذایی و غیره کاربرد وسیعی دارند. آنزیم های هیدرولیزکننده نشاسته در حال حاضر اهمیت زیادی در کاربردهای بیوتکنولوژی در صنایعدارند به طوری که جایگزین بیش از 75 درصد فرآیند هیدرولیز اسیدی نشاسته شدهاند. در این مطالعه ژن آلفا آمیلاز از باکتری Exiguobacterium sp.SH3جدا شد و بوسیله پلاسمیدpET-26bبه باکتریE.coli BL21 (DE3 بعنوان میزبان بیانی منتقل گردید. توالی اسید آمینه ایی این ژن نشان دهنده وجود سیگنال پپتید برای ترشح خارج سلولی آن میباشد. آنزیم نوترکیب تولید شده واجددنباله هیستیدینی در انتهایC- ترمینال میباشد که امکان خالص سازی آن بوسیله ستون کروماتوگرافی نیکل را فراهم می آورد. بیان این ژن در اشریشیا کلی بوسیلهSDS-PAGEو تهیه زایموگرام مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان دادند که بیان این ژن منجر به تولیدپروتئینی به وزن تقریبی 58 کیلو دالتون با فعالیت آمیلازی گردید. شرایط بهینه برای فعالیت آنزیم نوترکیب در 6/5pH = و دمای 30 درجه سانتی گراد مشاهده شد. علاوه بر این نتایج نشان دهنده مقاومت آنزیم در حضور یون های و حلال های مختلف می باشد. بر اساس همه این نتایج، این آنزیم می تواند کاربردهای سودمندی در فرآیندهای بیوتکنولوژی که در دماهای محیطی انجام می شوند داشته باشد