همسانهسازی ژن مصنوعیFusion (F) ویروس نیوکاسل جهت بیان در میزبان گیاهی

عامل بیماری نیوکاسلNDVعضو جنسAvulavirusمربوط به خانوادهیParamyxoviridaeمیباشد. بیماری نیوکاسل یکی از بیماریهای شایع در طیور بوده و پتانسیل وارد کردن خسارتهای اقتصادی جدی به صنعت دامپروری دارد. پوشش سطحی ویروس ازغشا سلول میزبان منشا میگیرد و دربرگیرنده گلیکوپروتئینهای هماگلوتینین - نورآمینیدازHN وفیوژن F است که اهداف مناسبی برای القای پاسخهای ایمنی علیه ویروسها به شمار میروند. هدف از این تحقیق، همسانهسازی سازه مصنوعی ژنF در ناقل بیانی گیاهی و انتقال آن به گیاه از طریق آگروباکتریوم است. به این منظور ابتدا مطالعات بیوانفورماتیک برای تعیین اپیتوپهای ایمنیزا ژن F,همچنین بهینهسازی کدونها جهت بیان در میزبان گیاهی (کلزا) انجام شد. سپس قطعهیFاز ناقل 57pUCحاوی سازه مصنوعیHN-F با روشPCR تکثیر و برای بررسی بیان، سازه نوترکیب در ناقل 1400pBIتحتکنترل پروموتر اختصاصی بذرFAE زیرهمسانه سازی شد. آنالیزPCRبا آغازگرهای اختصاصی، تکثیر قطعهF 900 جفت باز) را نشانداد و به منظور تایید بیشتر هضم آنزیمی توسط آنزیمهای برشی از داخل ناقل نوترکیب صورت گرفت. سازه نوترکیب حاوی قطعهF به درون سلول مستعد آگروباکتریوم تومفاشینس منتقل و با روش کلنیPCRحضور قطعهFتایید گردید. درادامه بیان پروتئین نوترکیبF در سیستم گیاهی مورد بررسی قرارمیگیردبررسی ایمنیزایی پروتئین نوترکیب تولید شده در گیاه کلزای تراریخت در مدل حیوانی از مراحل بعدی تحقیق خواهدبود.

کلیدواژه ها:

ویروس نیوکاسل ، پروتئین فیوژن ، آگروباکتریوم تومفاشینس