همسانه سازی و تائید مولکولی از بخشهای ایمنیزای سموم باکتریایی در ناقل اختصاصی گیاه

بیماریهای اسهالی همچنان بعنوان یکی از مهمترین معضلات بهداشت جهانی درتمامی ردههای سنی مطرح میباشند. از میان عوامل ایجاد کننده این بیماریها میتوان به اشریشیا کلی خونریزی دهنده EHEC و عامل وبا اشاره کرد. در گروهEHECسروتایپO157:H7شایعترین عامل ایجاد اسهال است که از طریق سمStx2ایجاد بیماری میکند. درVibrio choleraeنیز باکتری با تولید توکسین Ctxمنجر به بروز بیماری میگردد. هر دوی این سموم از ساختارAB5پیروی کرده که در آنها زیرواحدA بخش فعال آنزیمی و زیرواحدهایBمسئول اتصال سم به گیرندههای سطح غشای سلول میزبان میباشند. با توجه به غیر سمی بودن زیرواحدBو خاصیت ایمنیزایی ذاتی این زیرواحد، میتوان آن را کاندیدای مناسبی برای ایجاد ایمنی علیه این سموم معرفی کرد. هدف از این مطالعه بیان گیاهی پروتئین نوترکیب متشکل از زیرواحد اتصالی سمومCtxB و Stx2Bبصورت سازه ژنی مصنوعی با ترجیح کدونی گیاه میباشد. بدین منظورقطعه ژنی(CtxB و Stx2B) scبعد از تکثیر با روش PCRبه وکتورpTZ57R/Tمنتقل شده و بعد از تائید حضور قطعه، با روش هضم و اتصال آنزیمی به وکتور بیانی گیاهیpBI1400تحت کنترل پروموتر اختصاصی بذر گیاه کلزا Fatty Acid Elongase منتقل شد. پس از تائید حضور سازه ژنی با روش مولکولی، هضم آنزیمی و تعیین توالی سازه، انتقال آن به اگروباکتریوم تومفاسینس جهت تراریختی گیاه صورت گرفت. در نهایت ناقل نوترکیب حاصل جهت بیان پروتئین نوترکیب در بخشهای اختصاصی گیاه کلزا به گیاه منتقل میشود تا پس از بیان، ایمنیزایی آن در مدل حیوانی موش مورد ارزیابی قرار گیرد

کلیدواژه ها:

بیماریهای اسهالی ، Ctx ، Stx2 ، Vibrio cholerae ، EHEC