جداسازی و شناسایی Pseudomonas protegens از شیرخام و تحلیل مولکولی - پروتئومیکی آن در ژله ای شدن شیر پس چرخ استریل

مطالعه حاضر، مکانیزم های مولکولی و عملکردی ژله ای شدن شیر استریل شده با اتوکلاو را با تمرکز بر فعالیت Pseudomonas protegens و سایر گونه های سایکروتروف بررسی کرد. شیر خام جمع آوری شده از دامداری های اصفهان از نظر حضور گونه های Pseudomonas غربالگری شد و سویه P. protegens KSM۱ برای تحلیل دقیق انتخاب گردید. نتایج PCR نشان داد هیچ ایزوله ای حامل ژن AprX با اندازه ۸۹۰ جفت باز نیست و تحلیل ORF نیز تنها وجود ORFهای کوتاه تر از ۱۷۱ جفت باز را تایید کرد. تنوع ژنتیکی ۳۰ ایزوله با RAPD- PCR و پرایمر XD۵ ارزیابی شد و ضریب شباهت ۷۹/۰ تا ۰۰/۱ و واگرایی تا ۴۳٪ به دست آمد؛ به طوری که P. aeruginosa در یک خوشه منسجم قرار گرفت، اما P. protegens، P. koreensis، P. putida و P. fluorescens در شاخه های جداگانه توزیع شدند. بررسی SDS-PAGE نشان داد، نمونه های تلقیح شده تخریب شدید کازئین را تجربه کردند و وجود باند شاخص ۴۵–۵۰ کیلودالتن، بیانگر فعالیت آلکالین پروتئاز باکتریایی است. میزان پروتئولیز در نمونه های تلقیح شده به طور معنی داری به ویژه بین روزهای ۳ تا ۱۰ افزایش یافت (p≤۰.۰۵). در حالی که نمونه های شاهد تغییرات اندکی داشتند. این داده ها نشان می دهد پروتئازهای باکتریایی عامل اصلی تخریب پروتئین طی نگهداری هستند. در میان ایزوله ها، P. protegens KSM۱ مدل مناسبی برای مطالعه مکانیسم های فساد پروتئینی و توسعه راهبردهای پیشگیری از ژله ای شدن شیر فرادما محسوب می شود.

کلیدواژه ها:

شیر فرادما ، Pseudomonas protegens ، ژله ای شدن ، ، SDS PAGE ، RAPD-PCR