جداسازی و شناسایی مولکولی Escherichia coli جداشده از مدفوع گوسفندان

هدف: اشرشیا کلی یکی از مهم ترین عوامل بیماری زای دستگاه گوارش در حیوانات، به ویژه گوسفندان است که با ایجاد تلفات، کاهش بهره وری و افزایش هزینه های درمان، خسارات اقتصادی قابل توجهی به صنعت دامپروری وارد می کند. علاوه بر این، E. coli یک عامل بیماری زای مشترک بین انسان و حیوان محسوب می شود و می تواند سلامت انسان را نیز تهدید کند. بنابراین، شناسایی دقیق این پاتوژن از اهمیت ویژه ای برخوردار است. هدف این پژوهش، جداسازی و شناسایی اشرشیاکلی از مدفوع گوسفندان مبتلا به اسهال در شهر ابوغریب، بغداد، عراق، با استفاده از روش های باکتری شناسی، سیستم VITEK ۲ و واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) بر اساس ژن های uidA و uspA بود. همچنین بیماری زایی جدایه ها در موش های آلوده شده به صورت تجربی ارزیابی شد.مواد و روش ها: نمونه های مدفوع از ۴۰ راس گوسفند مبتلا به اسهال جمع آوری و بر روی محیط های کشت مک کانکی و ائوزین متیلن بلو کشت داده شدند. شناسایی اولیه باکتری های جداشده بر اساس ویژگی های کشت و آزمون های بیوشیمیایی انجام گرفت و سپس با استفاده از سیستم خودکار VITEK ۲ تایید شد. DNA ژنومی از جدایه های باکتریایی استخراج و واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن های uidA و uspA انجام شد. برای ارزیابی بیماری زایی، موش ها به صورت خوراکی با دوز ۱ × ۱۰⁸ واحد تشکیل دهنده کلنی در هر میلی لیتر آلوده شدند. پس از آن، نمونه های بافتی تثبیت شده و مطالعات آسیب شناسی بافتی بر روی روده و معده انجام گردید.نتایج: از مجموع ۴۰ نمونه بررسی شده، ۱۷ نمونه (۵/۴۲ درصد) از نظر Escherichia coli مثبت بودند. باکتری های جداشده در محیط مک کانکی کلنی های صورتی رنگ و در محیط EMB کلنی هایی با جلای سبز فلزی ایجاد کردند که از ویژگی های اختصاصی اشرشیاکلی است. این جدایه ها با استفاده از سیستم خودکار VITEK ۲ با ۹۷ درصد اطمینان به عنوان Escherichia coli شناسایی شدند. نتایج PCR تشکیل قطعات تکثیرشده (آمپلیکون) با اندازه های مورد انتظار ۶۲۳ جفت باز برای ژن uidA و ۸۸۴ جفت باز برای ژن uspA را نشان داد. بررسی های آسیب شناسی بافتی نشان داد که آلودگی تجربی موجب ایجاد ضایعات شدیدی در روده و معده موش ها گردید. این ضایعات شامل دژنراسیون پرزهای روده، نفوذ سلول های التهابی، تخریب مخاط، احتقان عروق خونی، و نکروز غدد و اپی تلیوم معده بود.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که درصد قابل توجهی از موارد اسهال در گوسفندان با حضور اشرشیاکلی همراه است. همچنین، به کارگیری همزمان روش های متداول باکتری شناسی و روش های مولکولی، دقت و اطمینان بیشتری در شناسایی این باکتری فراهم می کند و می تواند در تشخیص سریع و کنترل بیماری های ناشی از E. coli در دام ها موثر باشد.

کلیدواژه ها:

گوسفند ، واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) ، uidA ، uspA