همسانه سازی و بیان سازه نوترکیب HBHA-OmpL در سیستم بیانی پروکاریوتی با هدف معرفی یک سازه واکسن کاندید علیه سالمونلا تیفیموریوم

زمینه مطالعه: باکتری گرم منفی سالمونلا تیفی­موریوم به عنوان عامل ایجاد کننده بیماری سالمونلوز در انسان و دام مطرح است. در کنار رعایت موارد بهداشتی، یکی از اصولی­ترین راه های مقابله با این بیماری، مایه کوبی توسط نسل جدید واکسن­ها است که کمترین عوارض جانبی را دارند.هدف: مطالعه حاضر با هدف طراحی و ساخت سازه نوترکیب ایمونوژن، متشکل از آنتی­ژن OmpL از باکتری سالمونلا تیفیموریوم و ادجوانت HBHA و ارزیابی بیان آن در سیستم پروکاریوتی انجام شد.روش‎کار: فرایند استخراج DNA از باکتری­های سالمونلا تیفیموریوم و همچنین واکسن ب.ث.ژ انجام شد. هر یک از ژن­های OmpL و HBHA توسط پرایمرهای لینکردار تکثیر و با به کارگیری واکنش SOE-PCR به یکدیگر متصل شدند. در ادامه برای اتصال کایمر نوترکیب HBHA-OmpL به وکتور بیانی pET۲۲b(+)، ابتدا هر دو تحت تیمار هضم دو آنزیمی قرار گرفتند و سپس با استفاده از آنزیم T۴ لیگاز به یکدیگر متصل شدند. در نهایت نیز سازه کایمر شده با استفاده از فرایند شوک حرارتی به داخل سلول­های مستعد همسانه سازیE.coli (DH۵α)  و سلول­های مستعد بیانیE.coli BL۲۱ (DE۳)  منتقل شد. پس از القای بیان ژن، خالصسازی پروتئین­ها توسط ستون رزین کروماتوگرافی نیکل NTA انجام شد. در نهایت نیز کیفیت بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از ژل SDS-PAGE ۱۲ درصد ارزیابی شد.نتایج: مطابق یافته های مشاهده شده، فرایندهای PCR، SOE-PCR و Colony-PCR به ترتیب، تکثیر صحیح ژن های HBHA و OmpL، ساخت سازه نوترکیب و همچنین تایید انتقال وکتور بیانی نوترکیب به سلول های مستعد DH۵α وBL۲۱ (DE۳) را تایید کردند. از طرفی بررسی بیان و خالصسازی پروتئین نوترکیب HBHA-OmpL با وزن مولکولی kDa ۵/۴۹ نیز توسط ژل SDS-PAGE ۱۲ درصد تایید و موفق بودن این مرحله نیز تایید شد.نتیجه­گیری نهایی: بر اساس مشاهدات، بیان سازه نوترکیب ایمونوژن HBHA-OmpL در سیستم بیانی پروکاریوتی با هدف تولید یک واکسن کاندید علیه سالمونلا تیفیموریوم با موفقیت امکان پذیر است.

کلیدواژه ها:

سالمونلا تیفیموریوم ، سیستم پروکاریوتی ، واکسن نوترکیب ، HBHA ، OmpL