شناسایی و ویژگی یابی Escherichia coli O۱۵۷:H۷ در آب آشامیدنی شهر بغداد با استفاده از روش های فنوتیپی، ایمنی شناسی و مولکولی

هدف: هدف از این مطالعه جداسازی و شناسایی Escherichia coli O۱۵۷:H۷ از آب آشامیدنی مورد مصرف انسان در شهر بغداد بود. ایزوله ها با استفاده از روش های متداول فنوتیپی و بیوشیمیایی مشخصه یابی شدند. سپس توانایی آن ها در تولید سم شیگا (Stx) با استفاده از آزمون الایزا (ELISA) تعیین گردید. علاوه بر این، شناسایی مولکولی و تعیین ژنوتیپ انجام شد. برای شناسایی ژن های stx۱ و stx۲ از واکنش زنجیره ای پلیمراز چندگانه (MPCR) استفاده شد. هدف دیگر، مقایسه این ژن ها به عنوان شاخص های تشخیصی و اپیدمیولوژیک با روش های تشخیصی سنتی بود.مواد و روش ها: در مجموع ۳۰ نمونه آب آشامیدنی از دو سوی شهر بغداد (کرخ و رصافه) در فاصله زمانی ژوئیه تا اوت ۲۰۲۳ جمع آوری شد. نمونه ها در بطری های شیشه ای استریل ۲۵۰ میلی لیتری حاوی ۳ درصد تیوسولفات سدیم برداشت شدند. برای جداسازی E. coli O۱۵۷:H۷ از محیط کشت مک کانکی سوربیتول حاوی سفیکسیم-تلوریت (CT-SMAC) استفاده شد. شناسایی بیوشیمیایی با سیستم API ۲۰E انجام گرفت. همچنین، تولید سم شیگا با روش ELISA بررسی شد. شناسایی مولکولی ژن های stx۱ و stx۲ با استفاده از تکنیک PCR صورت پذیرفت.نتایج: از میان ۳۰ نمونه آب آشامیدنی بررسی شده، ۲۵ ایزوله E. coli به دست آمد. آزمون های بیوشیمیایی ۱۰ ایزوله را به عنوان E. coli شناسایی کردند، در حالی که سیستم API ۲۰E شش ایزوله را تایید نمود. بررسی سرولوژیک با آزمون آگلوتیناسیون سریع لاتکس نشان داد که چهار ایزوله به سروتیپ E. coli O۱۵۷:H۷ تعلق دارند. نتایج ELISA نشان داد که هر چهار ایزوله قادر به تولید سم شیگا هستند. تحلیل MPCR نشان داد که یک ایزوله حامل ژنstx۱ (۱۸۰ جفت باز) بوده و هر چهار ایزوله دارای ژن stx۲ (۲۵۵ جفت باز) بودند.نتیجه گیری: سم شیگا (Stx) که با نام وروتوکسین نیز شناخته می شود، یک سم AB₅ است که توسط برخی سویه های E. coli، به ویژه E. coli O۱۵۷:H۷، تولید می شود و ارتباط نزدیکی با سم تولیدشده توسط Shigella dysenteriae دارد. وجود ژن های stx۱ و stx۲ در ایزوله های آب آشامیدنی می تواند خطر بالقوه ای برای سلامت عمومی را نشان دهد و همچنین بر کاربرد روش های مولکولی به عنوان ابزارهایی قابل اعتماد برای شناسایی و پایش E. coli بیماری زا در آب آشامیدنی تاکید می کند.

کلیدواژه ها:

آب آشامیدنی ، الایزا ، ژن های Stx۱ و Stx۲ ، شهر بغداد ، E. coli O۱۵۷:H۷