طراحی و ساخت سازه نوترکیب ژن E۲ ویروس هپاتیت C ژنوتیپ a۱ برای مطالعات بعدی واکسن

ویروس هپاتیت C گسترش جهانی داشته و از علل اصلی ابتلا به سیروز کبدی و از مهمترین دلایل مرگ و میر در سرتاسر جهان است. در حال حاضر واکسن مناسبی برای پیشگیری از ابتلا به این ویروس وجود ندارد. گلیگوپروتئین E۲ یکی از این پروتئین ها است که عامل اصلی در اتصال و ورود به سلول میزبان است. هدف اصلی این مطالعه ساخت سازه بیانی از ژن E۲ ویروس هپاتیت C در میزبان باکتریایی بود. به منظور انجام این مطالعه ژن گلیکوپروتئین E۲ از سروتیپ a۱ از بیماران جداسازی و شناسایی شد. با استفاده از RT-PCR ژن جداسازی شد و در ادامه با استفاده از Nested-PCR تکثیر شد. سازه بیانی ژن در وکتور pET۲۱α ساخته شد و به درون باکتری های مستعد (DH۵-α) E.coli، انتقال داده و کلنی های حاوی وکتور مدنظر را براساس مقاومت به آمپی سیلین و با استفاده از روش Colony PCR انتخاب شد. به منظور آنالیز نهایی و تایید کلونینگ ژن E۲ قطعات کلون شده تعیین توالی شد و نتایج تعیین توالی، در پایگاه NCBI بلست شد. نتایج بدست آمده از این مطالعه نشان دهنده صحت مراحل انجام آزمایش و کلون شدن دومین حفاظت شده ژن E۲ در وکتور pET۲۱α و بیان این ژن در باکتری E.coli DH۵αبود. با توجه به نقش گلیکوپروتئین E۲ در اتصال و ورود به سلول و همچنین توان تحریک سیستم ایمنی همورال و سلولی توسط آن، E۲ کاندید مناسبی برای مطالعه برای تهیه واکسن است. سازه نوترکیب این مطالعه برای بررسی بیشتر و بررسی ساختار پروتئین و ایمنی زایی باید در مراحل بعدی مورد مطالعه قرار بگیرد.

کلیدواژه ها:

ویروس هپاتیت C ، گلیکوپروتیئن E۲ ، Nested-PCR ، کلون سازی