خالص سازی و بررسی خواص سینتیکی آنزیم هیستامیناز از گونه خلر ( Lathyrus sativus ) با استفاده از کروماتوگرافی تعویض آنیون

مقدمه: مسمومیت با هیستامین به طور مستقیم در ارتباط با نگهداری نامناسب غذاها می باشد. دی آمین اکسیداز، دآمیناسیون اکسیداتیو هیستامین و آمین های بیوژنیک دیگر مانند کاداورین و پوترسین را کاتالیز می کند. دی آمین اکسیدازهای گیاهی پراکندگی زیادی در خانواده لگومینه مانند نخود، خلر و ماش دارند. به این دلیل، این مطالعه انجام گرفت تا خالص سازی و خواص کینتیکی آنزیم هیستامیناز از جوانه های خلر آزمایش گردد. بحث و نتیجه گیری: در مجموع آنزیم هیستامیناز گیاهی به عنوان یک آنزیم جدید در پیشگیری از مسمومیت با هیستامین امیدوار کننده است یافته ها: فعالیت ویژه آنزیم نهایی خالص شده برای سوبسترای هیستامین ۵۰ واحد در میلی گرم پروتئین یادداشت شد و خواص کینتیکی آنزیم (۰۵/۳=Vmax ، ۵/۲=Km) و هموژنوسیتی آنزیم خالص شده بوسیله SDS-PAGE در ناحیه ۷۲ کیلو دالتون نشان داده شد. مواد و روش ها: خالص سازی آنزیم بوسیله روش انجام شده فدریکو و همکاران با یکسری تغییرات بود. به طور کوتاه، با استفاده از رسوب دادن بوسیله سولفات آمونیوم، دیالیز علیه بافر پتاسیم ۵۰ میلی مولار ۷pH= به مدت ۱۸ ساعت، تغلیظ بوسیله کیسه های دیالیز بر روی پلی اتیلن گلیکول، گذاشتن روی ستون DEAE-۵۲ سفادکس که قبلا با بافر فسفات پتاسیم ۱۵ میلی مولار و ۵/۵pH= به تعادل رسیده بود حاوی یک میکرومول CuCl۲ و در نهایت آنزیم با افزایش شیب نمک در M ۲/۰ خارج گردید. هموژنوسیته آنزیم بوسیله تکنیک SDS-PAGE در هر مرحله تائید شد و فعالیت دی آمین اکسیداز بوسیله اسپکتروفتومتر مشخص گردید.

کلیدواژه ها:

Histaminase ، Enzyme kinetic ، Lathyrus sativus ، هیستامیناز ، کینتیک آنزیمی ، Lathyrus sativus