شناسائی جدایه های Sinorhizobium meliloti بومی بر اساس توالی 16SrRNA

مقایسه توالیهای rRNA ابزاری قوی برای روابط فیلوژنی و تکاملی در بین باکتریها، آرکئا و موجودات یوکاریوت است . این روشها تأییدی مطمئن برای شناسایی باکتریها تا سطح سویه میباشد . باکتری Sinorhizobium meliloti از نظر کشاورزی دارای اهمیت زیادی است زیرا این باکتری با یونجه که یکی از گیاهان علوفهای مهم و منبع تغذیه دامها ست رابطه همزیستی تثبیت کنندگی نیتروژن مولکولی هوا را دارد . بیش از 600 هزار هکتار از مزارع ایران زیر کشت یونجه میباشند . در این تحقیق 5 جدایه از باکتری Sinorhizobium meliloti بومی خاکهای مناطق مختلف ایران از نظر توالی 16srRNA مورد بررسی قرار گرفتند . برای این منظور با توجه به دشواری استخراج DNA از ریزوبیوم با استفاده از روش فنل کلروفرم اصلاح شده ) Agrawal و همکاران، (2006 از پنج جدایه DNA ژنومی استخراج شد ( شکل DNA (.1 ژنومی با استفاده از PCR و پرایمرهای fD1 و Weisburg ) rD1 و همکاران، (1991 از نظر تکثیر توالی 16 srRNA مورد بررسی قرار گرفتند . شرایط PCR برای جدایههای مختلف در جدول 1 آمده است . واکنشها در حجم 25 میکرولیترحاوی 70 mmol/l بافر 2/5 mmol/L ,PCR از MgCl2 ، 200 mmol/L از هر 1 µmol/L ، dNTPsاز هر پرایمر، حدود30 نانوگرم ازDNA و 1/5 واحد taq DNA پلیمراز در 30 سیکل انجام شد .