بررسی اثر جهشزایی هدفمند به روش QuickChange در موقعیت لوسین ۲۶۲ و تبدیل به آرژنین بر ساختار آنزیم اورات اکسیداز

تالش برای تقویت ثبات اوریکاز در شرایط مختلف، به ویژه دما، مورد توجه محققان قرار گرفته است. جهش زایی هدفمند یکی از تکنیک هایی است که برای پایدارسازی پروتئین هایی از قبیل آنزیم اورات اکسیداز استفاده می شود. این آنزیم از کلاس اکسیدوردوکتازها بوده و در اکسیداسیون اوریک اسید و تبدیل آن به آلانتوئین نقش دارد که این عمل با کاهش سطح اوریک اسید و جلوگیری از بیماری هایی از قبیل نقرس و هایپراوریسمی همراه است. برای این موضوع پس از بررسی و انتخاب نقطه جهش در موقعیت لوسین ۲۶۲ با توجه به اینتراکشن های موجود، جهش به آرژنین ایجاد و پرایمر مربوطه طراحی و سنتز شد. پس از انجام واکنش PCR و انتقال محصول به سلول مستعد، استخراج پالزمید انجام و صحت ایجاد جهش به کمک توالی یابی، بررسی گشت. کشت باکتری، بیان و تخلیص اوریکاز جهش یافته انجام شد و اکتیویتی آن اندازه گیری و با آنزیم طبیعی مقایسه گردید.

کلیدواژه ها:

اورات اکسیداز ، جهش زایی هدفمند ، لوسین ۲۶۲ ، واکنش PCR