جداسازی ژن عامل رونویسی ANAC025 از آرابیدوپسیس (Arabidopsis thaliana) و همسانه سازی آن در ناقل القایی pER8

عامل رونویسی (At1G61110)ANAC025، جزو خانوده عوامل رونویسی NAC است که از بزرگترین خانواده عوامل رونویسی در گیاهان هستند که با ژنهای مرتبط با رشد و نمو و پاسخ به تنشها در ارتباط هستند. بر اساس آنالیزهای صورت گرفته در بانکهای اطلاعاتی بیان ژن، به نظر می رسد ANAC025 دارای بیان اختصاصی در گل است. به کمک پروموترهای القایی یک ژن تراریخت می تواند در مرحله نموی- زمانی خاص بیان شود و در نتیجه امکا مطالعه اثر این بیان موقت فراهم می شود. در ناقل pER8، پروتئین امتزاجی XVE با گیرنده استروئیدی خود حضور استرادیول را در محیط تشخیص داده و به آن متصل می شود و سپس امکان اتصال به پروموتر امتزاجی پائین دست را یافته و ژن انتقالی هدف را تحت القای استرادیول بیان می کند. هدف از اجرای این پژوهش، تهیه سازه لازم برای بیان القایی تحت تیمار استردادیول ژن ANAC025 در گیاه آرابیدوپسیس است تا بتوان ژنها و شبکه تنظیمی پائین دست این ژن را شناسایی نمد. در این تحقیق ابتدا RNA از اندام مختلف استخراج شد و پس از حذف DNA ژنومی، cDNA تک رشته ای ساخت شد. سپس از cDNA اندام مختل به عنوان الگو برای PCR به همراه آغازگرهای اختصاصی شامل سایتهی برشی مناسب استفاده شد که فقط از cDNA گل تکثیر حاصل شد که نشان می دهد این ژن در بافتهای رویشی بیان ندارد. محصول PCR سپس در ناقل حدواسط pJET با پروتکل اختصاصی همسانه سازی گردید که پس از تأئید کلون مثبت با هضم آنزیمی و توالی یابی از ناقل تخلیص شده برای همسانه سازی قطعه مورد نظر در ناقل pER8 استفاده شد. پس محصول اتصال با تراریزش به روش شوک حرارتی به سلولهای مستعد باکتری ای. کولی سویه DH5α انتقال یافت. در نهایت حضور ANAC025 در ناقل pER8 با هضم آنزیمی و توالی یابی تأئید شد.

کلیدواژه ها:

عامل رونویسی ، ANAC025 ، ناقل pER8 ، نمو گل