کلون و بیان ناحیه متغیر انتی بادی مونوکلونال ضد EGFR در باکتری E.coli به منظور تولید آنتی بادی تک زنجیره ای

گیرنده فاکتور رشد اپیدرمال (EGFR) از مولکولهای کلیدی در تنظیم تکثیر سلول بوده و بیان بالای آن در بسیاری تومورها اتفاق می فاتد. فعالسازی مسیر پیامده ی EGFR منجر به تکثیر سلولی، آنژیوژنز، متاستاز و کاهش آپوپتوز می شود. نقش EGFR در ایجاد سرطانها منجر به طراحی عواملی همچون آنتی بادیهای منوکلونال ضد EGFR شده که برای اهداف درمانی و تشخیصی مورد استفاده قرار می گیرد اما سایز بزرگ آنتی بادیهای کامل مانعی برای نفوذ آنها در تومور می باشد. آنتی بادیهای Scfv دارای ناحیه اتصال به آنتی ژن بوده که شامل نوای متغیر زنجیره های سنگین (VH) و سبک (VL) است که توسط یک لینکر پپتیدی به هم متصل اند. هدف مطالعه حاضر کلون و بیان نواحی متغیر زنجیره های سبک و سنگین آنتی بادی ضد EGFR از کلون C225 به منظور تهیه ScFv ضد EGFR می باشد. پس از استخراج RNA از سلولهای رده ی c225 و سنتز cDNA، ژنهای نواحی متغیر زنجیره های سبک سنگین با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، تکثیر شده و در وکتور PCR2.1 کلون شدند. پس از تعیین توالی، این ژنها به وکتور بیانی pET22b منتقل شده و بیان آنها با SDS-PAGE بررسی شد. همچنین آزمایشات بهینه سازی بیان شامل بررسی اثرات زمان و غلظتهای مختلف IPTG بر میزان تولید آنتی بادی محلول بررسی گردید. تعیین توالی ژن های مربوط به نواحی متغیر زنجیره های سبک و سنگین توالی ژنهای کلون شده را تأئید نمود. بررسی بیان با SDS-PAGE نشان داده که آنتی بادی تولید شده با غلظت مناسبی در E.coli بیان می گردد که بصورت باند واضحی در محدوده 26 کیلو دالتون ظاهر گردید.

کلیدواژه ها:

، E. coli. ScFv ، آنتی بادی منوکلونال ، آنتی بادی تک زنجیره