سازه خاموشی ژن میواینوزیتول سینتاز در سویا با حامل جیمینی ویروس

بازدارندگی اختصاصی بیان ژن با واسطه RNA کوتاه دو رشته ای را RNAi می گویند. به عبارت دیگر این شیوه مکانیسمی برای خاموشی ژن (PTGS) می باشد که به وسیله RNA در رشته ای کوتاه یا siRNA انجام می شود و کمپلکس mRNA, RISC هومولوگ با siRNA را تجزیه می کند. ژن میواینوزیتول سینتاز، آنزیم کلیدی در مسیر ساخت ماده ضد عغذیه ای فیتات می باشد. هدف از این تحقیق ساخت سازه اختصاصی ژن میواینوزیتول 3 فسفات سینتاز با حامل جمینی ویروسی می باشد تا در مراحل بعدی توانایی انتقال این نوع سازه ها را بررسی کنیم. در این تحقیق پس از تکثیر هر دو قطعه سنس و آنتی سنس به صورت جداگانه در وکتور Pgme-Easy همسانهسازی شد و پس از در کنار هم قرار دادن هر دو رشته، کاست اولیه شکل گرفت و gmMIPS3 نامگذاری گردید که سپس این کاست به وکتور بیانی pRNA-CMV3.1-Neo انتقال داده شد که این وکتور جمینی ویروسی مخصوص انتقال RNAi می باشد. وکتور بیانی ساخته شده را pSilencer-GMIPS3 نامگذاری گردید که سپس این کاست به وکتور بیانی pRNA-CMV3.1-Neo انتقال داده شد که این وکتور جمینی ویروسی مخصوص انتقال RNAi می باشد. وکتور ساخته شده را pSilencer-GMIPS3 نامگذاری کردیم. این وکتور ابتدا به باکتری E.coli ترانسفورم گردید و بعد از همسانه سازی در آن، استخراج پلاسمید از باکتریهای تراریخت صورت گرفت که هضم آنزیمی مؤید حضور کاست در وکتور بیانی pSilencer-GMIPS3 بود که در نهایت با اسپرمیدن و پوشش طلا با استفاده از دستگاه تفکیک ژنی به کالوسهای سویاشلیک گردید.