جداسازی و تعیین توالی دو ژن CCD۴a و CCD۴bدر زعفران وحشی

ترکیبات آپوکاروتنوئیدی عملکردهای ارتباطی متنوعی را در گیاهان موجب می شوند. آپوکاروتنوئیدها نتیجه برش آنزیمی کاروتنوئیدها هستند که توسط دی اکسیژنازهای کاروتنوئیدی (CCD) کاتالیز می شوند. خانواده CCD۴ بزرگترین خانواده CCD های گیاهی است. در این پژوهش DNA ژنومی از برگ های تازه زعفران وحشی Crocus haussknechtii BOISS استخراج و به عنوان الگو جهت تکثیر دو ژن CCD۴a و CCD۴b در واکنش PCR استفاده شد. محصولات PCR پس از تخلیص توالی یابی شدند. سپس توالی ژن ها با ژن زعفران زراعی موجود در بانک ژن مقایسه شد و درخت فیلوژنتیکی مربوط به توالی آنها ترسیم گشت. همچنین مقایسه اسیدهای آمینه پروتئین ها و ترسیم ساختار فضایی پروتئین این دو ژن انجام پذیرفت. نتایج نشان دادکه تعداد نوکلئوتید در ژن CCD۴a برابر با ۲۴۰۲ و در ژن CCD۴b ۲۳۷۳ کیلو باز است. دندروگرام مربوط به توالی ژن CCD۴a نشان داد که گونه ها براساس شباهت در ترتیب اسیدهای نوکلئیک به ۵گروه مجزا تقسیم شدند که بیشترین شباهت مربوط به ژنCCD۴a زعفران زراعی ایرانی و به میزان ۸۲/ ۹۹ بود. همچنین نمودار دندروگرام برای ژن CCD۴b به سه گروه تقسیم بندی شد که کمترین فاصله این ژن با ژن های گونه های زعفران بود. با مشخص شدن نواحی اگزونی، توالی پروتئینی ژن های CCD۴a و CCD۴b تعیین شد که تعداد اسیدهای آمینه آنها به ترتیب برابر با ۵۷۷ و ۵۶۷ بود. یافته های این تحقیق می تواند اطلاعات با ارزشی در رابطه با رفتار و واکنش آنزیم های CCD۴a و CCD۴b در مسیر سنتز آپوکاروتنوئیدهای C.haussknechtii فراهم کند و همچنین می تواند در برنامه های انتقال ژن از زعفران وحشی به زعفران زراعی مفید باشد.

کلیدواژه ها:

آپوکاروتنوئیدها ، بانک ژن ، پروتئین ، دندروگرام