بررسی اثرات بازدارندگی برخی پپتیدهای حشرات علیه باکتری Pseudomonas tolaasii عامل بیماری لکه قهوه ای قارچ سفید دکمه ای

باکتری Pseudomonas tolaasii عامل بیماری لکه قهوه ای قارچ خوراکی از مهمترین عوامل محدود کننده تولید این محصول می باشد که تاثیر مستقیمی بر کاهش کیفیت محصول دارد. . باتوجه به عدم وجود راه حل مناسب در مدیریت این بیماری با کاربرد سموم شیمایی و آنتی بیوتیک ها ،که اثرات ناخواسته سمیت و مقاومت میکروبی را در پی دارند، تحقیقات گسترده ای در زمینه شناسایی ترکیبات ضد باکتری طبیعی و سازگار با سلامت محصول، درحال انجام است. در تحقیق حاضر نیز بدین منظور، پس از جداسازی و شناسایی گونه بیمارگر باکتری Pseudomonas tolaasii با روشهای معمول آزمایشگاهی، اثرات ضد باکتریایی ده پپتید حاصل از گونه های مختلف حشرات، نظیر پروانه سکروپیا، مورچه مرمیسیا، موریانه، زنبور عسل اروپایی، مگس میوه مدیترانه ای، مگس اسطبل و مگس گوشت، علیه این بیماری مورد بررسی قرار گرفتند. مقادیر حداقل غلظت بازدارندگی از رشد به میزان ۵۰% (MIC) مقادیر حداقل غلظت کشندگی (MBC)پپتیدهای مورد نظر علیه باکتری بیمارگر به روش تست الایزا به دست آمد. برای تایید نتایج MBC محتوی میکروپلیت ها مجدد کشت شدند. جهت ارزیابی شدت و کیفیت علایم بیماری در محیط آزمایشگاهی، سطح بلوک های قارچ با غلظت۱mM از پپتیدهای موثر پوشانیده شد و سپس با سوسپانسیون باکتری حاوی ۱۰۸ cfu/ml مایه زنی شدند. پپتیدها با توجه به نوع بروز علایم در شش گروه متفاوت (B۰-B۱-B۲-B۳-B--B۵) قرار گرفتند. سطوح مختلف شدت بروز علایم بیماری، از شاخص بدون علامت (B۰) تا شاخص علایم پوسیدگی قهوه ای همراه با نقاط فرورفته(B۵) مورد ارزیابی قرار گرفت. مقادیر MIC نشان داد که پپتید های Cecropin A(پروانه سکروپیا)، Scal-stomoxyn(مگس اسطبل)، Lser-Cecropin۱(مگس گوشت) در غلظت های متفاوتی سبب کاهش رشد حداقل ۵۰% جمعیت باکتری P. tolaasii شدند. کمترین مقدار MBC نیز در پپتید Cecropin A در غلظت µM ۶.۲۵ مشاهده شد. در نتایج بررسی کیفیت و شدت بروز علایم، پپتید Cecropin A در سطح B۰، بطور کامل کلاهک قارچ را در شرایط آزمایشگاهی علیه باکتری P. tolaasiiمحافظت نمود و از بروز علایم بیماری جلوگیری کرد. پس از آن پپتید Scal-stomoxyn با ایجاد لکه های مختصر زرد رنگ در سطح شاخص B۱ قرار گرفت و تا حدودی مانع پیشرفت علایم بیماری شد. پپتیدهای Spinigerin(موریانه)، Ceratotoxin (مگس میوه مدیترانه ای) ، Formaecin-۱ (مورچه مرمسیا)،Metchnikowin۱(مگس سرکه)، Apidaecin Ia(زنبور عسل اروپایی) و Metchnikowin- ۲(مگس سرکه) نیز با ایجاد لکه های قهوه ای پوسیده در سطحB۴ قرار گرفتند. شدیدترین سطح بروز علایم نیز در شاخص (B۵) پوسیدگی قهوه ای همراه با نقاط فرورفته بر روی کلاهک قارچ بود که تنها در نمونه شاهد مثبت حاوی محیط کشت و باکتری مشاهده شد. تمامی آزمایشات در ۳ تکرار انجام شد و آنالیز آماری با روش تجزیه واریانس و مقایسه میانگین های مقادیر MICو MBC به روش دانکن انجام شد. وفق نتایج این مطالعه، می توان از پپتیدهای ضد میکروبی با منشا حشرات به ویژه Cecropin ها در کاهش بیماری لکه قهوه ای قارچ سفید دکمه ای بهره برد.

کلیدواژه ها:

Pseudomonas tolaasii ، قارچ خوراکی ، پپتیدهای ضد میکروبی ، Cecropin