همسانه¬سازی ژن LysA در وکتور بیانی در راستای افزایش تولید اسیدآمینه L- لیزین

L – لیزین یکی از اسیدهای آمینه ضروری است که در تغذیه انسان و دام اهمیت بسزایی دارد. این اسیدآمینه به دلیل کاربرد بسیار در صنایع دارویی و غذایی حائز اهمیت می باشد. تولید صنعتی لیزین از نظر اقتصادی بسیار مهم است. سالانه چندین هزار تن لیزین در جهان بوسیله Corynebacterium glutamicum تولید می شود. روش بررسی: پس از تهیه پرایمرهای اختصاصی با دو توالی برشی برای آنزیم های NheI و HindIII، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر یافت و جهت تعیین ترادف و هضم آنزیمی مناسب در وکتور pTZ۵۷R/T کلون گردید. پس از تعیین ترادف و اطمینان از صحت ژن مورد نظر، قطعه ژنی با انتهای چسبنده در وکتور بیانی pET۲۸a کلون و در سویه E.coli BL۲۱(DE۳) ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب با روش های هضم آنزیمی و تعیین ترادف ارزیابی شد. یافته ها: ژن LysA به طول kb ۳/۱ با توالی صحیح کلون گردید. هضم آنزیمی با موفقیت انجام شد بدین ترتیب که ژن LysA به طور کامل از پلاسمید جدا گردید. همسانه سازی با استفاده از SDS-PAGE تایید شد. بحث: در این مطالعه برای اولین بار بیان ژن آنزیم دی آمینوپیمیلات دکربوکسیلاز (۴.۱.۱.۲۰ EC) همسانه گردید و وکتور بیانی بررسی شد.

کلیدواژه ها:

"pET۲۸a" ، " Corynebacterium glutamicum" ، "Diaminopimelate decarboxylase enzyme"- "pTZ۵۷R/T " ، "دی آمینوپیمیلات دکربوکسیلاز"-"کورینه باکتریوم گلوتامیکوم"- "pET۲۸a"-"pTZ۵۷R/T "