بررسی افزایش طول عمر سلول های CHO به وسیله مهار کننده بالقوه آنزیم کاسپاز ۷ انتخاب شده با روش داکینگ مولکولی

افزایش تقاضا برای داروهای پروتئینی درمانی جدید مانند آنتی ژن های ویروسی , واکسن ها, آنتی بادی های مونوکلنالبیولوژیکی مستلزم بهینه سازی و بهبود مستمر فناوری های تولید است. امروزه حدود ۷۰ %پروتئین های درمانی نوترکیب توسطساخته میشوند. یکی از استراتژی های مهم در افزایش میزان تولید نهایی پروتئین (CHO) سلول های تخمدان همستر چینیو جلوگیری از کاهش تعداد سلول های میزبان تولید کننده (CHO) نوترکیب، افزایش طول عمر سلول های تخمدان همستر چینیپروتئین نوترکیب، از طریق مهار یا کاهش آپوپتوز آنها در طول پروسه تولید است. یکی از بازیگران اصلی پدیده آپوپتوز عضوی ازخانواده آنزیم های پروتئاز بنام کاسپاز می باشد. داده های بیوشیمیایی کاسپاز- ۷ که یکی از کاسپازهای اجرایی است را به عنوانآخرین کاسپاز در آپوپتوز، حداقل در برخی از انواع سلول،معرفی می کنند. مهارکننده های کاسپاز به عنوان ابزاری برای تحقیق با اینامید توسعه یافته اند که در نهایت بتوان از آنها برای جلوگیری از مرگ سلولی و زنده ماندن میزبان های تولید پروتئین نوترکیباستفاده کرد. اهداف: در این پژوهش برآن شدیم که با استفاده از داکینگ مولکولی ترکیبی را پیدا کنیم که آنزیم کاسپاز ۷ را مهار کند و متعاقبا موجب مهار آپوپتوز و افزایش بقا در سلول های تخمدان همستر چینی که یکی از مهمترین میزبان های تولید پروتئیننوترکیب گردد.روش تحقیق: پس از گرد اوری ترکیبات بومی ایران دارای خاصیت ضد اپوپتوزی و همچنین ترکیبات دارای تاییدیه fda و دارایتاییدیه سازمان های رگولاتوری جهانی غیر از fda بهترین ترکیبات برای مهار آنزیم کاسپاز ۷ را شناسایی کردیم و متعاقبا تستهای in vitro از جمله آنالیز mtt و اندازه گیری فعالیت آنزیم کاسپاز ۰ و اندازه گیری فعالیت آپوپتوز و اندازه گیری بیان ژن آنزیمکاسپاز ۰ را انجام دادیم تا اطمینان حاصل کنیم که نتایج حاصل از آنالیز های in silico (داکینگ مولکولی و داینامیک مولکولی)نتایج مشابهی را نیز در شرایط آزمایشگاهی بر روی سلول های CHO نشان می دهد.دستاوردها: نتایج حاصل از داکینگ مولکولیرسپریدون را ترکیبی ضد آپوپتوز معرفی کرد که با سرکوب کاسپاز ۷ به طور موثر موجب سرکوب آپوپتوز می شود و متعاقبا انجام تست های in vitro بر روی سلول های تخمدان همستر چینی نشان داد ترکیب رسپریدون با سرکوب آنزیم کاسپاز ۷ در این سلولها باعث افزایش بقا و زنده مانی این سلول ها می گردد .

کلیدواژه ها:

سلول های تخمدان همستر چینی ، آپوپتوز ، کاسپاز ۷ ، پروتئین نوترکیب ، گیاهان بومی ایران ، داکینگ مولکولی