کشت توام بساک و میکروسپورهای آزادشده از بساک در محیط دو لایه به منظور تولید گیاهان دابلدهاپلوئید رز

روش های گوناگون کشت بساک به منظور ارائه راهکار مناسب، جهت تولید رز Rosa hybrida دابلد هاپلوئید بررسی شده اند. در این مقاله کولتیوارهای رز Exotic و Elegant مورد استفاده قرار گرفتند. بساک ها در یک محیط دو لایه شامل محیط جامد همراه با یک لایه مایع در بالا کشت گردیدند. دو محیط جامد Nitsch & Nitsch و Murashige & Skoog در قسمت تحتانی و محیط مایع AT3 همراه با آمینواسید (لاکتالبومین هیدرولیزات) و قند سوکروز در لایه فوقانی استفاده شدند. عوامل مهم در این پروتکل شامل انتخاب جوانه های گل با بیش از 50 % میکروسپورهای در مرحله تک سلولی انتهایی، سپس کشت بساک ها در محیط جامد و دو لایه به مدت یک ماه در تاریکی مداوم می باشند. در این روش بساک ها در محیط مایع فوقانی شناور و پس از چند هفته شکوفا شده و میکروسپورها وارد محیط کشت می گردند. در آغاز، برخی ترکیبات ه ورمونی شامل BAP ،(2، 4، 8 mg/l) IAA ،(2، 5 mg/l) 2,4-D ؛ mg/l 1 ، 0/5 و کینتین mg/l 3/2 ، 1/6 ، 0/2 در محیط MS و کولتیوارهایExotic و Elegant بررسی شدند. نتایج به دست آمده نشان داد که این ترکیبات هورمونی تفاوت معنی داری در القای کالوس ندارند، در واقع این ترکیبات هورمونی موفق به القای کالوس نشدند. در کولتیوار Exotic پنج محیط پنج محیط + MS ،MS محیط مایع NN + NN ،(MS/NN) NN مایع AT3 + NN ،(NN/NN) مایع با قند سوکروز+ لاکتالبومین هیدرولیزات MS/AT3-LS با ترکیبی از BAP mg/l 1 ، 0/5 و IAA mg/l 8 ، 4 بررسی شدند. نتایج به دست آمده نشان داد که محیط MS بهترین محیط برای القای کالوس بوده تفاوت معنی داری میان ترکیبات هورمونی مشاهده نشد. اما پس از دو ماه در محیط MS/AT3-LS با ترکیب هورمونی BAP+8IAA 0.5 از میکروسپورهای آزاد شده از بساک ها جنین به دست آمد که برای اولین بار تولید جنین از کشت توام بساک و میکروسپورهای آزاد شده در رز گزارش می گردد.

کلیدواژه ها:

رز Rosa hybrida ، بساک ، القای کالوس ، جنین ، هاپلوئید