کلونینگ ژن هورمون رشد انسانی نوترکیب در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس 3900 NZ

لاکتوکوکوس لاکتیس یکی از بهترین باکتریهای اسید لاکتیک مطالعه شده برای کارهای ژنتیکی میباشد L. Lactis برای تولید پروتئینهای زیستی مفیدوبرای انتقال DNA پلازمیدی به سلولهای یوکاریوتی مناسب میباشد. سیستم بیان ژن در این باکتری که کنترل شده با نایزین میباشد، یکی از موفقترین وگسترده ترین ابزار استفاده شده برای تنظیم بیان ژن در باکتریهای گرم مثبت میباشد. این سیستم بیان تضمین میدهد که نه ژن مقاومت به آنتی بیوتیکونه آنتی بیوتیک در پروتئین بدست آمده حضور ندارد . در این مطالعه از L. lactis NZ3900 که یک سویه جهش یافته با حذف lacF میباشد به عنوان میزبان استفاده شد. قطعه ژنی کدکننده هورمون رشد با روش PCR تکثیر شد سپس با دو آنزیم محدودالآثر Nco1 و Sac1 هضم دوگانه روی ژن و وکتور انجام شد و ژن پایین دست پروموتور القاءشونده با نایزین nisA در پلازمید 8149 pNZ توسط آنزیم T4DNA لیگاز الحاق یافت. سپس پلازمید نوترکیب به روش الکتروپوریشن به داخل L. lactis منتقل شد. حذف ژن lacF باعث عدم رشد این سویه بر روی لاکتوز میشود مگر اینکه این ژن از طریق پلازمید فراهم شود غربالگری در این سیستم براساس توانایی رشد بر روی لاکتوز میباشد. محیط اختصاصی که برای غربالگری کلنیهای Lac + استفاده میشود محیط الیکر میباشد کلنی هایی که وکتور را دریافت کرده باشند بر روی این محیط زرد می شوند.

کلیدواژه ها:

لاکتوکوکوس لاکتیس ، هورمون رشد انسانی ، لاکتوز ، پلاسمید ، کلونینگ