طراحی وساخت ناقل نوترکیب CRISPR ژن بیماری زای EscD باکتری باکتریE.coli O۱۵۷:H۷

E.coli O۱۵۷:H۷ یکی از سوش های بیماری زا می باشد. ژن escD واقع در ناحیه LEE درشکل گیری و فعالیت سیستم ترشحی نوع III که برای ایجاد بیماری توسط این ناحیه لازم است، وجود دارد. سیستم کریسپیر CRISPR از یک RNA کوچک به نام gRNA و یک اندونوکلئاز به نام Cas۹ تشکیل شده که اتصال این دو باعث هدایت اندونوکلئازبه سمت یک توالی اختصاصی می شود و پس اتصال به توالی خاص خود، منجر به ایجاد شکستگی دورشته DNA می شود. سرانجام با عمل سیستم نوترکیبی سلول، موجبات ایجاد جهش فراهم می گردد. هدف این مطالعه ساخت پلاسمید نوترکیب سیستم کریسپیر حاوی RNA راهنمای لازم برای ایجاد برش و جهش در ژن بیماری زای escD باکتری E.coli O۱۵۷:H۷ بود. الیگونوکلئوتیدها بااستفاده از سایت Crispr gRNA Design Tool طراحی وپس از دورشته ای شدن و اتصال به وکتور خطی کریسپر به سلولهای باکتری میزبان منتقل شدند. نتایج یافته ها با استفاده از ژل الکتروفورز و آزمایش PCR بررسی شدند.آنالیز ژل الکتروفورز، تشکیل gRNA دورشته ای وآزمایش PCR، کلونینگ موفق ژن بیماری زای escD را در ناقل بیانی کریسپر ثابت کرد. با ساخت ناقل نوترکیب CRISPR ایجاد تغییرات اصلاحی دقیق در ژنوم با اهدافی ازجمله تخریب ژنهای بیماری زا و ژن درمانی امکان پذیر می گردد.

کلیدواژه ها:

اصلاح ژنتیکی ، کریسپر ، ژن EscD ، باکتری . E.coli O۱۵۷:H۷