بیان سازه دکامر لومازین سنتاز با منشا بروسلایی در سیستم بیانی پروکاریوتی

لومازین سنتاز بروسلایی، آنزیم دخیل در بیوسنتز ریبوفلاوین، مرکب از ۱۰ زیرواحد مشابه می باشد که به صورت کپسیدی تجمع می یابند. با توجه به کاربردهای وسیع لومازین سنتازها در زمینه های بیولوژی، تولید لومازین سنتاز در مقیاس بالا و خالص سازی کارآمد آن ضروری می نماید. در مطالعه حاضر، ساختار اولیه لومازین سنتاز بروسلا ملی تنسیس از پایگاه داده NCBI دریافت گردید. توالی لومازین سنتاز ابتدا با استفاده از واکنش های زنجیره ای پلیمراز تکثیر گردید و سپس کلون و بیان گردید. بیان سازه با استفاده از پلازمید بیانی pET۲۸a و در باکتری BL۲۱ DE۳ انجام گردید. برای حذف بقایای دیواره باکتری و خالص سازی پروتئین، از روش های رسوب دهی با آمونیوم سولفات و تکنیک های کروماتوگرافی تعویض یونی استفاده گردید. از آزمون های الیزا و وسترن بلات جهت تایید بیان و مانیتورینگ مراحل استفاده گردید. خالص سازی لومازین سنتاز با استفاده از روش کروماتوگرافی با استفاده از سفادکس دی اتیل آمینو اتیل DEAE منجر به حصول باند یگانه در الکتروفورز با ژل پلی اکریلامید (SDS-PAGE) گردید. نتایج این بررسی نشان داد که روش های بهینه سازی بیان و خالص سازی مورد استفاده در این تحقیق، می تواند در تولید لومازین سنتاز نوترکیب بروسلایی خالص و در مقیاس بالا به عنوان یک محصول نوترکیب ارزشمند در تحقیقات واکسن استفاده گردد.

کلیدواژه ها:

بروسلا ، بیان ، خالص سازی ، لومازین سنتاز ، نوترکیب