مطالعه توان رشد و سم زایی کلستریدیم بوتولینم «A تیپ » متاثر از تغییرات PH نمک، حرارت و زمان نگهداری در محیط مدل B.H.I

در این مطالعه ، توان رشد و سم زایی کلستریدیم بوتولینم تیپ A با تداخل اثر متقابل عوامل درون ا ثر و برون اثر، به صورت طرح فاکتوریل، متاثر از مقادیر مختلف PH نمک، حرارت و زمان نگهداری مورد بررسی قرار گرفته است و نتایج حاصله در قالب طرح کاملا تصادفی و تست ANOVA و تجزیه واریانس صفت زمان کدرشدن (Time to ) turbidity و صفت زمان سم زایی (Time to toxicity ) در برنامه کامپیوتری SAS ارائه گردیده است . این مطالعه در طی سه مرحله : اسپورزایی؛ تداخل اثر متقابل عوامل چندفاکتوری ؛ و سپس تعیین وجود سم در موش؛ صورت پذیرفت. در مرحله اول پس از سه بار کشت و پاساژ متوالی باکتری کلستریدیم بوتولینم تیپ A تهیه شده از دانشگاه دیویس کالیفرنیا و انتقال آن به محیط کشت جامد Egg Yolk و(Agar(EYA و (Brain Heart Infusion Agar (BHI به صورت کشت پر و سطحی در شرایط بی هوازی و گرم خانه گذاری در ۳۵ C اسپورزایی از روز چهارم شروع شده و با مشاهدات روزانه ویدیو میکروسکوپی از طریق تهیه لام مرطوب و گسترش رنگ آمیزی اسپور با مالاشیت گرین تا روز پانزدهم یعنی تا زمانی که حداکثر اسپورزایی (بیش از ۹۰%در یک شان میکروسکوپی ) حاصل گشت ادامه داشت .سپس اسپورها تحت شرایط آسپتیک و طی ۵ بار رقیق سازی با ژل فسفات بافر و سانتریفوژ یخچال دار ۱۰۰۰۰-۵۰۰۰ دور در ۴C ط ی ۱۵ دقیقه شستشو داده شدند . و در خاتمه شمارش اسپور در یک میلی لیتر از سوسپانسیون حاصل شد .در مرحله دوم مدت زمان جهت رشد و مشاهده کدورت با میزان تلقیح ۱۰۴*۴ اسپور در هر میلی لیتر از محیط آبگوشت BHI در داخل لوله آزمایش به ترتیب با دو میزان (۵/۵ و ۶/۵ ) PH سه غلظت نمک ( ۰/۵ ۳ ۶ )درصد و سه میزان حرارت ( ۱۵ و ۲۵ و ۳۵ ) درجه سانتیگراد در طی ۳۲ روز (روزهای ۲ و ۴ و ۸ و ۱۶ و ۳۲ ) مورد مطالعه قرار گرفت و نمونه های کدر در روزهای مزبور از گرمخانه خارج گردیدند و با استفاده از تهیه گسترش رنگ آمیزی و همچنین کشت خطی از لوله های کدر به پلیتهای EYA رشد باکتری تائید شد .در مرحله سوم به روش زیست سنجی و بر طبق دستورالعمل USDA آزمایشات تعیین سم نمونه ها ی کدر در موش انجام شد . نتایج نشانگر وجود اختلاف معنی دار در بین مقادیر متفاوت حرارت، نمک و PH در طی زمانهای کدورت بود (P<۰.۰۰۱) کاربرد متقابل غلظت نمک ۰/۶ ۵/۵ =PH و حرارت ۱۵C ۱۵ در طی ۳۲ روز نگهداری با تلقیح ۱۰۴*۴ باکتری کلستریدیم بوتولینم تیپ A در جلوگیری از رشد و سم زایی آن تاثیر قطعی د اشت. کاربرد نمک ۳ درصد در مقایسه با ۰/۵ درصد و همچنین حرارت ۲۵C در مقایسه با ۳۵C اثر بازدارندگی بیشتری در جلوگیری از رشد و سم زایی با کتری مزبور در ۶/۵=PH و در طی ۳۲ روز نگهداری د اشت و بالاخره یک اثر جایگزینی بین حرارت و نمک مشاهده شد به طوریکه کاربرد حرارت ۲۵C و نمک ۰/۵ درصد اثر مشابهی در بازدارندگی از رشد و سم زایی باکتری کلستریدیم بوتولینم تیپ A در مقایسه با حرارت ۳۵C و نمک ۳ درصد بود

کلیدواژه ها:

کلستریدیوم بوتو لینم تیپ A ، اسپورز ایی ، زمان کدر شدن ، زمان سم زایی