تعیین ارزش تشخیصی روش آنالیز منحنی ذوب مبتنی بر Multiplex Real time برای شناسایی گونه های انتروکوکوس

سابقه و هدف: انتروکوکوس ها می توانند سبب آلوده شدن فرآورده ای غذایی شوند. هدف از این پژوهش، جداسازی گونه های مختلف انتروکوکوس بر اساس روش Curve Analyzing Melting مبتنی بر Real time PCR در نمونه های مواد غذایی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، ۱۳۸ نمونه مختلف (گوشت مرغ، گوشت قرمز، شیر، پنیر) آلوده به گونه های مختلف انتروکوک از مجموع ۵۱۰ نمونه مورد بررسی از سطح شهر جمع آوری شد. شناسایی گونه های مختلف انتروکوکوس با هدف قرار دادن سایت های انحصاری در گونه های مختلف و طراحی پرایمرهای اختصاصی برای این نواحی بر اساس روشCurve Analizing Melting مبتنی بر Real time PCR صورت گرفت. یافته ها: بر اساس آنالیز منحنی های ذوب به روش Real Time PCR، ۸۴ ایزوله (۸۶/۶۰ درصد) انتروکوکوس فکالیس، ۴۸ ایزوله (۷۸/۳۴ درصد) انتروکوکوس فاسیوم، ۱ ایزوله (۷/۰ درصد) انتروکوکوس گالیناروم، ۴ ایزوله (۸/۲ درصد) انتروکوکوس آویوم و ۱ ایزوله (۷/۰ درصد) به عنوان انتروکوکوس کاسلی فلاووس شناسایی شدند. بیش ترین فراوانی ایزوله های انتروکوک به دست آمده مربوط به نمونه های گوشت مرغ با ۲۹ نمونه (۶۳/۲۴ درصد) و گوشت قرمز با ۲۱ نمونه (۴۴/۵۱ درصد) بود. هم چنین با قرار دادن نتایج حاصل از تعیین توالی آزمون PCR به عنوان شاخص استاندارد، حساسیت و ویژگی روش فنوتیپی برای انتروکوکوس فکالیس به ترتیب ۷۸/۹۴ درصد و ۷۴/۹۰ درصد، برای انتروکوکوس فاسیوم ۱۳/۸۹ درصد و ۷۷/۹۷ درصد، برای انتروکوکوس گالیناروم ۵۰ درصد و ۵۲/۹۸ درصد، برای انتروکوکوس آویوم ۶۶/۶۶ درصد و ۵۲/۹۸ درصد و برای انتروکوکوس کاسلی فلاووس ۵۰ درصد و ۵۶/۹۸ درصد به دست آمد. ارتباط معنی داری بین نوع نمونه و پراکنش گونه های انتروکوکوس مشاهده شد (۰۵/۰p≤). استنتاج: باتوجه به گستردگی و خطاپذیر بودن روشهای فنوتیپی در تعیین گونه انتروکوکوس ها ، و حسایت و ویژگی پایین این روش، استفاده از یک روش حساس و سریع الزامی است.

کلیدواژه ها:

Enterococcus ، Real-Time PCR ، melting curve analysis ، انتروکوکوس ، Real-Time PCR ، Curve Analyzing Melting