Cloning and evaluation of gene expression and purification of gene encoding recombinant protein containing binding subunit of coli surface antigens CS۱ and CS۲ from Enterotoxigenic Escherichia coli

زمینه و هدف: باکتری اشرشیا کلی انتروتوکسیژنیک از عوامل شایع اسهال است. فاکتورهای کلونیزاسیون و انتروتوکسین ها از عوامل اصلی حدت زا در این ارگانیسم هستند. باکتری مذکور از طریق فاکتورهای کلونیزاسیون به سطح سلول های اپیتلیال روده متصل می شود و انتروتوکسین ها را تولید می کند که این سموم باعث ترشح بیش ازحد مایعات و الکترولیت ها در لومن روده می شوند که درنهایت منجر به اسهال می گردند. به دلیل درمان مشکل و شیوع بالای این بیماری طراحی واکسن علیه این ارگانیسم یکی از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. پروتئین CooD – CotD به عنوان زیر واحدهای راسی CS۱ و CS۲ نقش مهمی را در اتصال باکتری به سلول های اپیتلیال روده ایفا می کنند. در این مطالعه بیان و تخلیص ژن کد کننده پروتئین کایمریک CooD – CotD به عنوان کاندیدای واکسن های زیرواحدی انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه ، بهینه سازی کدونی ژن کایمریک cooD – cotD با نرم افزار Gene Designer انجام شد. ژن موردنظر با روش PCR تکثیر و در وکتور کلونینگpJET۱.۲/blunt  همسانه سازی گردید و به منظور بیان در وکتور بیانیpET۲۸a  زیرهمسانه سازی شد. پروتئین با روش کروماتوگرافی نیکل تخلیص و با وسترن بلات ارزیابی شد. نتایج: حضور باند ۸۲ کیلودالتونی در ژل SDS-PAGE ۱۰ درصد بیان پروتئین کایمریک CooD – CotD را نشان داد که با روش وسترن بلات تایید گردید. میزان پروتئین تخلیص شده در این تحقیق ۱۲۱ میکروگرم در میلی لیتر بود. نتیجه گیری: مطالعات بیان و تخلیص پروتئین نشان داد که این پروتئین دارای بیان در میزبان همولوگ است.

کلیدواژه های Cloning and evaluation of gene expression and purification of gene encoding recombinant protein containing binding subunit of coli surface antigens CS۱ and CS۲ from Enterotoxigenic Escherichia coli:

Enterotoxigenic Escherichia coli ، CS۱ ، CS۲ ، Recombinant expression ، انتروتوکسیژنیک اشرشیا کلی ، CS۱ ، CS۲ ، بیان نوترکیب