بررسی ترکیب محیط کشت پیچیده برای بهبود تولید ایمونوتوکسین اونتاک بوسیله سویه اشریشیاکلی نوترکیب

چکیده  زمینه و هدف: در سال های اخیر به منظور درمان بسیاری از بیماری ها از جمله سرطان به روش های زیستی روی آوردند که یکی از پر کاربردترین این روش ها استفاده از پروتئین های نوترکیب می باشد. ایمونوتوکسین اونتاک یک داروی ویژه برای درمان سرطان جهت بیماران مبتلا به لوکمیا، لنفوما و ملانوما است. با توجه به رشد چشمگیر سرطان در جامعه امروزی، بومی سازی ساخت داروهای نوترکیب امری ضروری به نظر می رسد. در این تحقیق، بهینه سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت پیچیده برای بیان ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: این تحقیق یک مطالعه آزمایشگاهی است. ترکیب محیط کشت، غلظت های مختلفIPTG  به عنوان القاگر و زمان القاء در بیان ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک بهینه سازی شد. غلظت سلول بر اساس روش کدورت سنجی در طول موج ۶۰۰ نانومتر و میزان بیان پروتئین توسط روش SDS-PAGE  مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: محیط کشت پیچیده اصلاح شده حاوی: glucose: ۶g/l، K۲HPO۴: ۱۲.۵g/l، KH۲PO۴: ۲.۳g/l، Yeast extract:۲۰g/l، Tryptone: ۱۰g/l به عنوان محیط کشت بهینه تعیین گردید. بهترین زمان القاء توسط IPTG با غلظت ۰.۱mM، در کدورت نوری ۳=OD۶۰۰nm تعیین شد. بیشترین مقدار تولید بیومس و بیان پروتئین هدف در محیط کشت بهینه سازی شده به میزان ۵/۵=OD۶۰۰nm تعیین گردید. نتیجه گیری: استفاده از منبع کربن گلوکز در ترکیب محیط کشت پیچیده نسبت به محیط کشت LB بیان بهتری می دهد. همچنین، مقدار بیومس تولید شده نسبت به محیط کشت LB، ۵/۳ برابر افزایش نشان داد.  واژه های کلیدی: اونتاک، محیط کشت پیچیده، بهینه سازی

کلیدواژه ها:

ONTAK ، Complex culture medium ، Optimization ، اونتاک ، محیط کشت پیچیده ، بهینه سازی