تهیه، تخلیص و شناسایی اجزاء آنتی ژن های دفعی – ترشحی تاکی زوئیت های توکسوپلاسماگوندی سویه RH

خلاصهسابقه و هدف: مطالعات قبلی نشان داده است که آنتی ژن های دفعی – ترشحی (E/SA) تاکی زوئیت های توکسوپلاسما گوندی می توانند نقش مهمی دربیماری زایی, مصونیت میزبان در برابر آلودگی مجدد به انگل, تشخیص و افتراق مرحله حاد از مزمن توکسوپلاسموز داشته باشند. برای بررسی دقیق تر موارد فوق نیاز به اجزاء تخلیص شده این آنتی ژن ها می باشد. بنابراین هدف مطالعه حاضر تهیه, تخلیص و شناسایی اجزاء تشکیل دهنده این آنتی ژ ن ها و تعیین روش مناسب برای این منظور بود.مواد و روش ها:  ۱۰۸×۲ تاکی زوئیت توکسوپلاسما گوندی در دو میلی لیترمحیط کشت RPMI-۱۶۴۰ (در لوله های درب پیچ دار) سوسپانسیون و به مدت یک ساعت در ۳۷ درجه سانتیگراد تحت تکان ملایم قرار گرفتند، سپس محتوای هر لوله سانتریفوژ ( ۱۵ دقیقه در g۱۰۰۰ ) و مایع رویی به عنوان محلول حاوی E/SA دیالیز و تغلیظ گردید. در مرحله بعد این محلول به طریق کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با ستون ژل سفادکس G-۲۰۰ به ابعاد ۵/۲×۴۰ سانتیمتر و خروجی ۱۵ میلی لیتر در ساعت و کروماتوگرافی مبادله یون با ستونی به ابعاد ۱×۱۵ سانتیمتر از ژل کربوکسی متیل با خروجی ۶۰ میلی لیتر در ساعت تحت شیب خطی pH تفکیک گردید. بعد از آن اجزاء حاصل به روش Native- PAGE الکتروفورز شدند. یافته ها:  E/SA در ژل فیلتراسیون به سه جزء تفکیک شد، اما از کروماتوگرافی مبادله یونی آن دو پیک حاصل شد که پیک دوم در الکتروفورز Native- PAGE به یک باند تجزیه گردید. نتیجه گیری: نتایج نشان می دهد که کروماتوگرافی مبادله یون با شرایط این مطالعه روشی مناسب برای تفکیک E/SA (تهیه شده به روش پیشنهادی) تاکی زوئیت های توکسوپلاسماگوندی می باشد، زیرا بدون تغییر ساختار مولکولی پروتئین, اجزائی با درجه خلوص بالا و به میزان نسبتا زیادی حاصل می شود.  واژه های کلیدی: توکسوپلاسماگوندی, کروماتوگرافی تعویض یون, آنتی ژن های دفعی – ترشحی, الکتروفورز

کلیدواژه ها:

Toxoplasma Gondii ، Excreted/Secreted Antigens ، Ion-exchange Choromatography ، Electrophoresis ، ، توکسوپلاسماگوندی ، کروماتوگرافی تعویض یون ، آنتی ژن های دفعی – ترشحی ، الکتروفورز