بیان ریفولد و خالص سازی آزمایشگاهی پروتئین نوترکیب انسانی فاکتور رشد اپیدرم انسانی

مقدمه و هدف: فاکتور رشد اپیدرم انسانی یک تک زنجیره پلی پپتیدی با وزن ملکولی ۶۲۰۰ دالتون می باشد که به واسطهتحریک رشد و تکثیر انواع مختلفی از سلول ها به صورتی درون تن و برون تنی ، دارای کاربردهای گسترده ای در زمینه های بالینی و بهداشتی - آرایشی می باشد . همچنین باعث افزایش ساخت پروتئین در سلول های اپیدرمی ، ترمیم جراحت های قرنیه ، درمان زخم پای دیابتی ، زخم معده و مانع تکثیر سلول های سرطان معده در انسان می شود . این مطالعه با هدف کلونینگ و بیان ژن پروتئین نوترکیب انسانی فاکتور رشد اپیدرم (HrEGF) در اشرشیاکولای در شرایط آزمایشگاه انجام شد.موارد و روش کار: پس از اخذ توالی اسیدهای آمینه و نوکلئوتیدهای فاکتور رشد اپیدرم انسانی از سایت NCBI وUniProt ، توالی نوکلئوتید با فرمت FASTA و به طول ۱۷۰ جفت باز ردیابی شد. کدون بدست آمده با استفاده از نرم افزار E.coli codon usage analyzer۲.۰ و نقشه برش آنزیمی با استفاده از نرم افزار NEBcutter بهینه سازی شد.در نهایت ترانسفورماسیون وکتور به باکتری کلونینگ E. coli DH۵ ، هضم آنزیمی پلاسمید pUC۱۸ و وکتور بیانی pET-۲۴a با آنزیم های NdeI و BamHI-HF انجام شد.نتایج: محصول لیگاسیون (pET-۲۴a-IGF-۱) با غلظت ۳۵ به درون باکتری مستعد E. coli BL۲۱(D) ترانسفورمه شد. رشد باکتری ترانسفورم شده بر روی محیط کشت حاوی کانامایسین حاکی از تایید اتصال بود. تولید اولیه و ثانویه پروتئین نوترکیب ، به ترتیب با استفاده از SDS-PAG و وسترن بلاتینگ تایید شد.نتیجه گیری: با توجه به نتایج این مطالعه ،استفاده از آنتی بادی مونوکلونال اولیه آنتی EGF شرکت Abcam ، ریفولدینگپروتئین نوترکیب EGF و بهینه سازی آن جهت تعیین فرمولاسیون دارویی و کارآزمایی های بالینی پیشنهاد می گردد.

کلیدواژه ها:

اشرشیا کولای ، فاکتور رشد انسانی ، ریفولدینگ