شناسایی Brucella.spp در نمونه های شیر خام و پنیر به وسیله تکنیک Hemi Nested PCR

سابقه و هدف. بروسلا یک کوکوباسیل گرم منفی می باشد که میزبانهای آن شامل انسان، گاو، بز و گوسفند می باشد. بروسلا از طریق شیر و فراورده های لبنی انتقال یافته و در انسان سبب ایجاد تب مالت می شود. روشهای سرولوژیک تشخیص بروسلا از حساسیت و دقت کافی برخوردار نبوده و دارای نتایج مثبت و منفی کاذب فراوانی می باشند. هدف از این مطالعه بررسی کارایی تکنیک همی نستد PCR جهت تشخیص بروسلا در نمونه های شیر و پنیر می باشد. مواد و روشها. در این مطالعه ۱۵ نمونه شیر خام ، ۱۵ نمونه پنیر پاستوریزه و ۱۵ نمونه پنیر سنتی از سطح استان تهران جمع آوری گردید. DNAی نمونه ها به وسیله کیت DNP استخراج گردید. پس از بهینه نمودن راند اول و دوم تست PCR، حساسیت و اختصاصیت آن مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس تمامی نمونه ها به وسیله تست PCR بهینه شده مورد بررسی قرار گرفتند. یافته ها. محصول آمپلیکون تکثیر یافته در محصول اول PCR ،۴۴۳ جفت باز و در محصول دوم ۲۲۵ جفت باز بود. حساسیت تست PCR بهینه شده تا ۱۰۰ پارتیکل تعیین گردید. از ۱۵ نمونه شیر خام،۱۰ نمونه PCR مثبت، از ۱۵ نمونه پنیر پاستوریزه ۶ نمونه و از ۱۵ نمونه پنیر سنتی ۸ نمونه PCR مثبت شدند.نتیجه گیری . با توجه به نتایج بدست آمده ، تست PCR مورد بررسی در این مطالعه از حساسیت و دقت بسیار بالایی نسبت به روشهای متواتر برخوردار بوده، همچنین به نظر می رسد ضرورت استفاده از روشهای مولکولی به عنوان یک روش تاییدی جهت تشخیص بروسلا در کنار روشهای متداول غربالگری اجتناب ناپذیر می باشد.

کلیدواژه ها:

Brucella spp ، Milk ، Cheese ، Hemi Nested PCR ، بروسلا ، شیر ، پنیر ، Hemi Nested PCR