بررسی کارایی روشLAMP (Loop-mediated isothermal DNA amplification)

مقدمه:سالمونلاها از مهمترین باکتری های بیماری و عامل تیفوئید، باکتریمی، آنتروکولیت و سالمونلوز است که از عفونت های مشترک انسان و حیوانات می باشد. بیماریهای ناشی از این عامل یک معضل بزرگ بهداشتی در جهان به خصوص در کشورهای در حال توسعه از جمله کشور ما می باشد. بنابراین تشخیص سریع، دقیق و به موقع آن برای جلوگیری از اپیدمی و عوارض مخرب این باکتری ضروری به نظر می رسد. برای تشخیص سالمونلا روش های مختلفی وجود دارد که می توان به روش کشت، Immunoassay، و روش های مولکولی PCR ، Real-time PCR اشاره نمود. تمام این روش ها به زمان طولانی، تعداد زیاد باکتری درنمونه اولیه، تجهیزات گران قیمت آزمایشگاهی و به افراد متخصص در این زمینه نیاز دارند. هدف از این مطالعه بررسی کارایی روش نوین تشخیص مولکولی LAMP با روش PCRدر تشخیص عامل عفونی سالمونلا تیفی می باشد. مواد و روش ها: در این تحقیق روش PCR با روشLAMP جهت تشخیص ۷ سویه سالمونلای مختلف مورد بررسی و مقایسه قرار گرفتند. ژنوم باکتری ها طبق روش استاندارد استخراج و با پرایمرهای اختصاصی در دستگاه PCR بر اساس برنامه چرخه حرارتی تشخیص داده شدند. و در مقایسه با آن مجموعه پرایمرهای اختصاصی به روش LAMPدر یک دمای واحد در بلوک حرارتی ساخته شده در داخل کشور تکثیر و محصولات ایجاد شده در ژل الکتروفورز از طریق بررسی ایجاد کدورت به روش چشمی مورد تشخیص قرار گرفتند. یافته های پژوهش: بررسی نتایج دو روش در تشخیص مولکولی سالمونلاها نشان داد که روشLAMP سریعتر، ارزان تر و اختصاصی تر است و به جای دستگاه گران قیمت PCR و برنامه چرخه حرارتی چند دمایی آن با استفاده از یک بلوک حرارتی بسیار ساده و ارزان ساخت داخل کشور و در یک دمای واحد ۶۲ درجه سانتی گراد و همچنین با مشاهده کدورت حاصل از فرایند تکثیر ژن ها در روش جدید در مقایسه با روش الکتروفورز در بررسی محصولات PCR در زمان کوتاه تری به تشخیص اختصاصی این سالمونلا ها پرداخت. بحث و نتیجه گیری: این روش می تواند جهت تشخیص مولکولی سریع، دقیق و ارزان با کاربرد گسترده در آزمایشگاه های تشخیصی و بخصوص تشخیص عوامل عفونی در آزمایشگاه های مناطق محروم و همچنین آزمایشگاه های سیار مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

Salmonella ، molecular detection ، PCR ، DN ، LAMP ، سالمونلا ، تشخیص مولکولی ، PCR ، DNA ، LAMP