کشت بافت تخمدان ماهی قرمز حوض Carassius auratus

در این تحقیق کشت اولیه وکشت های مجدد اول و دوم (ساب کالچر اول و ساب کالچر دوم) بافت تخمدان ماهی طلایی Carassius auratus به منظور ایجاد یک مدل آزمایشگاهی از سلول های تخمدان این گونه انجام شد. یک عدد ماهی قرمز به وزن ۴۲ گرم و طول ۷ سانتیمتر با پودر گل میخک (۰.۲g/lit) بی هوش شد و تخمدان آن از بدن خارج و در یک ظرف پتری حاوی ۵ میلی لیتر محیط کشت L-۱۵، استرپتومایسین سولفات (۲۰۰ug/ml )، پنی سیلین پتاسیم جی (۲۰۰iu/ml) و آمفوتریسین (۵ug/ml )B منتقل شد. تخمک ها که در مرحله پیشرفته رسیدگی (مرحله IV)  بودند از تخمدان جدا شدند و تخمدان به وسیله یک سرنگ ۵ میلی لیتری به تکه های کوچک تر تبدیل شد. تکه های کوچک بافت تخمدان در ۵ میلی لیتر محیط کشت ۱۵%، L-۱۵ سرم  گوساله جنینی (FBS)، استرپتومایسین سولفات (۱۰۰ug/ml )، پنی سیلین پتاسیم جی ( ۱۰۰iu/ml) و آمفوتریسین (۲.۵ug/ml )B تحت دمای ۲۵ درجه سانتیگراد کشت داده شدند.  بعد از گذشت  دو هفته و تشکیل مقدار کافی لایه­­ سلولی بر روی کف فلاسک کشت، سلول­ها با محلول PBS حاوی آنتی­بیوتیک­ها  شستشو شدند،  از کف فلاسک کشت سلول از طریق تیمار با Trypsin-EDTA (%۲۵/.) جدا گردیدند و مجددا در ۵ میلی لیتر محیط کشت ۱۵% ، L-۱۵ سرم  گوساله جنینی (FBS)، استرپتومایسین سولفات (۱۰۰ug/ml )، پنی سیلین پتاسیم جی (۱۰۰ug/ml ) و آمفوتریسین  (۲.۵ ug/ml )B تحت دمای ۲۵ درجه سانتیگراد کشت داده شدند. پس از تشکیل مقدار کافی لایه­­ سلولی بر روی کف فلاسک کشت، در روز پانزدهم  همین مراحل برای انجام ساب کالچردوم نیز تکرار شد.  سلول­های حاصل از کشت اولیه و ساب کالچرهای اول و دوم بافت تخمدان ماهی قرمز همگی سلول های شبه­ ­فیبروبلاست (Fibroblast-like)  بودند.

کلیدواژه ها:

Ovary culture ، Goldfish ، Carassius auratus ، کشت تخمدان ، ماهی قرمز ، Carassius auratus