کلون سازی و بیان ژن میدکاین نوترکیب انسانی در اشریشیاکولای سویه ی اوریگامی

هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کنندهی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید. مواد و روشها: روش ها شامل کشت سلول، استخراج RNA، ساخت cDNA، تکنیک های کلون سازی، القای بیان با IPTG (ایزوپروپیل تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی بیان بهوسیله ی ژل پلی اکریل آمید و تایید توسط وسترن بلات بود. نتایج: ژن میدکاین در pET-۲۱a(+) کلون و سپس به اوریگامی منتقل شد. این فاکتور رشد در کلونی حاوی pET-۲۱a(+) نوترکیب پس از ۱۶ ساعت انکوباسیون در دمای ۱۸ درجه سانتیگراد با هم زدن در ۲۵۰ دور در دقیقه، در سطح سیتوپلاسمی بیان گردید. بیان پروتئین ۱۳ کیلودالتونی دارای دم هیستیدینی از طریق وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: با توجه به اینکه سویه اوریگامی در ژن های TrxB و gor جهش یافته است، سینوپلاسم محیطی اکسید کننده می باشد، بههمین سبب باعث افزایش تشکیل باندهای دی سولفید میشود. بنابراین بهنظر میرسد که پس از بیان میدکاین، باقی ماندههای سیتوزین بهصورت محلول باقی میمانند. این شرایط باعث بهوجود آمدن محیط مناسبی برای فولدینگ صحیح پروتئین و حل شدن آن میشود.  

کلیدواژه ها:

اشریشیاکولای ، بیان ، پروتئین نوترکیب ، کلون سازی ، میدکاین