مقایسه دو روش Allele Specific PCR و PCR Sequencing در شناسایی HLA-B27

زمینه و هدف: آنتی ژن های لوکوسیت انسانی HLA یکی از اجزای سیستم ایمنی بوده که برای عملکرد سیستم ایمنی ضروری می باشد، و با بسیاری از بسیاری ها در ارتباط هستند. زن های HLA نسخه انسانی ژن MHC هستند. به طور کلی HLA ها به سه دسته کلاس III,II,I تقسیم می شوند. HLA-B27 یکی از اعضای کلاس I بوده که ارتباط بسیار قوی و نزدیکی با بیماری های اسپوندیلیت آرتریت به ویژه اسپوندیلیت آنکیلوزان AS دارد. مطالعات نشان داد که انتی ژن HLAA-27 مهم ترین عامل ژنتیکی در بروز این بیماری می باشد به طور متداول در آزماشگاه های تشخیصی از روش های سرولوژی مبتنی بر آنتی بادی به منظور HLA-Typing استفاده می شوند که دارای اختصاصیت پایینی هستند، اما روش های مولکولی مبتنی بر DNA اختصاصیت و حساسیت بالاتری برای شناسایی آلل های مختلف HLA از جمله HLA-B27 دارند و نتایج قابل اطمینانی به دست می دهند. در این مطالعه دو روش مولکولی Allele Specific PCR و PCR Sequencing برای شناسایی HLA-B27 با یکدیگر مقایسه شدند. مواد و روش ها: در این مطالعه کاربردی دو روش Allele Specific PCR و PCR Sequencing برای شناسایی HLA-B27 در 100 نمونه ی خون از جمعیت عمومی که به صورت تصادفی انتخاب شده بوند به اجرا درآمده هم مقایسه شدند. پس از استخراج DNA توسط کسیت های تجاری واکنش Allele Specific PCR بهینه سازی شد و به اجرا درآمد و پس از یافتن نمونه های HLA-B27 مثبت، به طور انتخابی چند نمونه HLA-B27 مثبت و منفی توسط PCR Sequencing مورد ارزیابی قرار گرفتند.یافته ها: در این تحقیق از میان 100 نمونه مورد مطالعه 5 نمونه ی HLA-B27 مثبت توسط Allele Specific PCR یافت شد. پس از انجام PCR Sequencing، نتایج حاصل از این روش Allele Specific PCR روشی مطمئن و با اختصاصیت بالا برای شناسایی HLA-B27 بوده و می تواند جایگزین روش های سرولوژیک در آزمایشگاه های تشخیصی گردد. همچنین روش Allele Specific PCR نسبت به PCR Sequencing روش مناسب تری به منظور HLA-Typing می باشد چون افراد برای لوکوس HLA عمدتاً هتروزیگوت هستند این در حالی است که PCR Sequencing برای شناسایی الل های هموزیگوس مناسب می باشد.

کلیدواژه ها:

و PCR Sequencing ، Allele Specific PCR ، شناسایی HLA-B27