بررسی فعالیت ACC دآمیناز در ریزوباکتری‏های جدا شده از خاک‏های مناطق شمال کشور

مقدمه: باکتری‏های ریزوسفری محرک رشد گیاه که حاوی آنزیمِ (1- آمینـو سـیکلوپروپان -1- کربوکـسیلیک اسید) دآمیناز هستند، می‏توانند برای بهبود رشد گیاهان به‏ویژه تحت شرایط تنش محیطی کاربرد داشته باشند. این تحقیق با هدف بررسی توان سویه‏های بومی در تولید آنزیم ACCدآمیناز انجام گرفت‏‏. مواد و روش‏‏ها: از 8 نمونه خاک ریزوسفری و غیر‏ریزوسفری، کشت به روش تهیه رقت‌های متوالی در محیط‏های اختصاصی تهیه شد. به منظور آزمون نیمه کمی توان تولید ACCدآمیناز در جدایه‏های به‏دست آمده، قطر کلونی‏ها در پلیت به روش لکه‏گذاری پس از مایه‏کوبی و گرماگذاری در روزهای 1، 2 و 5 ارزیابی شد. توانایی تولید آنزیم ACCدآمیناز در سویه‏های منتخب، با استفاده از تراکم نوری رشد در طول موج 504 نانومتر در محیط‏های مناسب ارزیابی شد. میزان فعالیت آنزیمACC‏ دآمیناز با تعیین غلظت آلفا کتوبوتیرات آزاد شده برای سویه‏های منتخب انجام گرفت. آزمون‌های بیوشیمیایی و میکروبیولوژیک برای شناسایی تمامی سویه‏های منتخب انجام شد. در نهایت، شناسایی سویه منتخب که دارای بیش‏ترین میزان فعالیت آنزیم بود، با تکثیر و تعیین توالی ژن 16S rRNAانجام گرفت. نتایج: تعداد 445 جدایه، خالص شد و با آزمون نیمه کمی توان تولید ACC‏دآمیناز، تعداد 17سویه انتخاب شد. بر اساس توانایی جدایه‏ها در تولید آنزیم، 9 سویه انتخاب شد و نتایج شناسایی مقدماتی نشان داد که سویه‌های منتخب به جنس‏های Pseudomonas، Bacillusو گروهActinomycetesمتعلق هستند. بررسی میزان فعالیت آنزیم نشان داد که سویه 12  Kot با بیش‏ترین مقدار فعالیت آنزیم به میزان 4369/826 نانومول آلفا کتوبوتیرات/میلی‏گرم پروتئین/ ساعت، در گروه سودوموناس های فلورسنت و به گونه Pseudomonas brassicacearum متعلق هستند. بحث و نتیجه‏گیری: با توجه به فعالیت در خور توجه آنزیم ACCدآمیناز در این سویه بومی به‏دست آمده (4369/826 نانومول آلفا کتوبوتیرات/میلی‏گرم پروتئین/ ساعت) در مقایسه با سویه‏های مشابه، می‏توان با بهینه‏سازی شرایط تولید آنزیم و تهیه فرمولاسیون مایه تلقیح بر پایه باکتری محرک رشد گیاه به منظور استفاده در مزرعه بهره گرفت.  

کلیدواژه ها:

1- آمینـو سـیکلوپروپان -1- کربوکـسیلیک اسید دآمیناز ، 1- آمینـو سـیکلوپروپان -1- کربوکـسیلیک اسید ، سویه‏ های منتخب