تکثیر و همسانه سازی ژن آلفا توکسین باکتری کلوستریدیوم پرفرینجنس در باکتری E. coli
محل انتشار: فصلنامه بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره: 11، شماره: 4
سال انتشار: 1398
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 394
فایل این مقاله در 20 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JOAGK-11-4_005
تاریخ نمایه سازی: 18 فروردین 1399
چکیده مقاله:
اهداف: هدف از انجام این پژوهش، تکثیر و همسانهسازی شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی ژن کشنده آلفاتوکسین (α-Toxin) باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس با اندازههای به ترتیب 1100 و 750 جفت باز با استفاده از ناقل بیانی pET28a در باکتری E.coli بود.
مواد و روشها: استخراجDNA ژنومی با استفاده از کیت کیاژن صورت گرفت. آغازگرهای جلوبرنده و برگشت در آزمایشگاه طراحی و در ناحیه ابتدایی آغازگرها ردیفهای آنزیمهای برشگر HindIII و XhoI مطابق با ناحیه کلونینگ پلاسمید مورد نظر اضافه گردید. قطعات ژنی مورد نظر با روش PCR معمولی تکثیر و در ناقل pET28a با کمک روش شوک حرارتی کلون شدند. استخراج DNA پلاسمیدی با استفاده از روش لیز قلیایی صورت گرفت.
نتایج: نتایج ژل الکتروفورز محصولات PCR، تکثیر واضح و واحد شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی قطعات ژنی مورد نظر را مطابق با اندازه های مورد انتظار نشان داد. بعلاوه با استفاده از آزمایش هضم آنزیمی منفرد و دوگانه توسط آنزیم های برشگر HindIII و XhoI همسانه سازی ژنهای آلفاتوکسین در باکتری میزبان و تولید باکتریهای نوترکیب تایید شد.
نتیجهگیری: با توجه به موفقیت آمیز بودن دقیق کلونینگ ژنهای آلفاتوکسین در باکتریهای بیانی میزبان، میتوان گفت که پرایمرهای طراحی شده در این تحقیق برای تکثیر ژن آلفاتوکسین بسیار اختصاصی بوده و به عنوان مارکر شناسایی و طبقه بندی این باکتریها میتوانند استفاده واقع شوند. همچنین با ساخت احتمالی واکسنهای نوترکیب ژنتیکی مهندسیشده میتوان کنترل و مقابله با پاتوژنهای مهمی همچون باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس را امکانپذیر ساخت.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
حسینعلی ساسان
گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه شهید با هنر کرمان، کرمان، ایران
مهین رسانی
دانشجوی کارشناسی ارشد، بخش مهندسی علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید با هنر کرمان،
سمانه کارآموز
دانشجوی کارشناسی ارشد، بخش مهندسی علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید با هنر کرمان،
علی اسماعیلی زاده کشکوئیه
دانشگاه شهید باهنر کرمان
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :