کلون و بیان ژن نوترکیب هومون رشد با استفاده از برچسب تیوردوکسین

هدف: در قرن حاضر، تولید داروهای نوترکیب افزایش یافته است. از جمله این داروها، هورمون رشد می باشد که به علت مشکلاتی که در پروسه­ی بیان نوع سیتوپلاسمی و پری پلاسمی این پروتئین وجود دارد، یافتن راه حلی که بتواند بیان را بهینه نماید ضروری به نظر می رسد. لذا در این تحقیق با استفاده نمودن از trx-tag بیان هورمون رشد را به صورت محلول بهینه شد که علاوه بر افزایش بیان پرتئین (حل مشکل پری پلاسمی) از تشکیل انکلوزیون بادی (مشکل سیتوپلاسمی) جلوگیری می نماید.مواد و روش­ها: سنتز ژن و کاست ژنی به منظور بیان هورمون رشد در سیستم بیانی pET 32a صورت گرفت. کاست ژنی شاملtrx-tag  برای محلول سازی پروتئین،His tag  به منظور خالص سازی و انتروکیناز در ابتدای ژن rHgh به منظور جداسازی برچسب های قبلی از این پروتئین می باشد.نتایج: بعد از کلون سازی این ژن در وکتور و بیان آن، تایید آن توسط وسترن بلات صورت گرفت. نتایج به دست آمده با استفاده از نرم افزارهای آنالیز ژل درصد بیانی حدود  از کل بیان را در سویه نوترکیب نشان می­دهد.نتیجه گیری: در این تحقیق، نشان داده شد که با استفاده از Trx-tag می توان پروتئین را به حالت محلول در آورد و میزان بیان را بالا برد در ادامه با انجام مراحل  تخمیر و پایین دستی می توان به نتایج بهتری دست یافت. 

کلیدواژه ها:

هورمون رشد ، پروتئین محلول ، برچسب تیوردوکسین