طراحی یک Multiplex-PCR برای تشخیص و تمایز همزمان کمپیلوباکتر ژژونی و کمپیلوباکتر کلی

سابقه و هدف: کمپیلوباکتر ژژونی و کمپیلوباکتر کلی به عنوان علل اصلی گاستروانتریت حاد در انسان شناخته شده اند. بدلیل طبیعت سخت رشد کمپیلوباکترها، کشت باکتری بصورت روتین در بسیاری از آزمایشگاههای بالینی انجام نمی شود. شناسایی گونه های کمپیلوباکتر، با استفاده از تکنیک های مولکولی، می تواند برای تشخیص سریع، دقیق و مطالعات اپیدمیولوژیک مناسب باشد. هدف از این مطالعه، طراحی یک روش Multiplex-PCRبا استفاده از ژن های cadF، hipO و aspبرای تشخیص همزمان گونه های C. jejuni و C. coli از نمونه های بالینی بود. مواد و روش ها: با رضایت آگاهانه و در طی یک دوره 19 ماهه، 980 نمونه مدفوع از کودکان مشکوک به کمپیلوباکتریوز ومراجعه کننده به بیمارستان کودکان تهران، جمع آوری و مورد بررسی قرار گرفتند. جهت ارزیابی اولیه، نمونه ها بر روی محیط انتخابی mCCDAکشت داده شدند. پس از 48 ساعت، برای تایید کلنی های مشکوک، رنگ آمیزی گرم و سایر آزمایشات بیوشیمیایی انجام شد. در نهایت، پس از استخراج DNA از کشت خالص، Multiplex PCRارزیابی گردید. یافته ها: از میان بیماران وارد شده، 5/48% مذکر و 5/51 % مونث بودند. بر اساس نتایج کشت، 35 بیمار کمپیلوباکتر مثبت بودند (33 مورد (94%) کمپیلوباکتر ژژونی و 2 مورد (6%) کمپیلوباکتر کلی). آزمون Multiplex-PCR نشان داد که جنس کمپیلوباکتر، می تواند با استفاده از قطعه هدف 400bp از ژن cadF شناسایی شود. همچنین می توان با استفاده از ژنهای hipO و asp، بترتیب گونه های C. jejuni (735bp) و C. coli (500bp) را بطور همزمان تشخیص و تمایز داد. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که Multiplex-PCR طراحی شده، می تواند مطابق با روش کشت و سریعتر از آن، برای تشخیص کمپیلوباکترها و تمایز آنها در سطح گونه استفاده شود.

کلیدواژه ها:

، Multiplex-PCR ، کمپیلوباکتر ژژونی ، کمپیلوباکتر کلی