بررسی میزان تولید آنزیم لیپاز توسط پنی سیلیوم کرایزوژنوم سویه ی KC884440.1 بهینه سازی شرایط دمایی و بررسی ارتباط ما بین قدرت ترشح آنزیم لیپاز و بیماریزایی میکروارگانیسم

امروزه لیپازها بیوکاتالیست های مهمی هستند که واکنشهای با ارزشی را هم در محیط آبی و هم در محیط غیر آبی انجام می دهند.در میان لیپازهای گیاهی، حیوانی و میکروبی، لیپازهای میکروبی بیشترین کاربرد را دارند. زیرا میکروبها می توانند براحتی کشت داده شوند و لیپازهای حاصل از آنها می تواند به راحتی طیف وسیعی از واکنشهای هیدرولیتیکی و سنتزی را کاتالیز کنند. لیپازها در زمینه های گسترده ای از علم بیوتکنولوژی بویژه لبنیات )رسیدن پنیر، بهبود و توسعه طعم، تولید پنیر اصلاح شده آنزیمی EMC (، شوینده ها، مواد دارویی )ایبوپروفن، ناپروکسن(، مواد شیمیایی، کشاورزی )آفت کشها، حشره کش ها( و شیمی روغن )هیدرولیز چربی و روغن، سنتز بیوسورفاکتانت( کاربرد دارند. و در سالهای آینده در بسیاری از زمینه های جدیدتر به عنوان یک بیوکاتالیست بالقوه کاربرد خواهند داشت. از لیپازهای قارچی به خاطر هزینه پایین استخراج، مقاومت به pH و حرارت، گزینش پذیری سوبسترا و فعالیت در حلال های آلی در مقایسه با لیپازهای باکتریایی بیشتر استفاده می شود. تعداد 20 نمونه از خاک جنگلی ناهار خوران گرگان جمع آوری و به آزمایشگاه دانشگاه آزاد اسامی واحد گرگان منتقل شد.عمل رقت سازی روی نمونه های خاک انجام و نمونه ها به میزان 5- 10 بار رقیق و مقدار یک میلی لیتر از هر نمونه به محیط کشت های PDA و YGC منتقل شد . در مرحله ی خالص سازی با توجه به رشد بهتر قارچ ها روی هر محیط کشت عمل خالص سازی روی همان محیط انجام شد.شناسایی اولیه بر اساس مرفولوژی کلنی و بررسی میکروسکوپی و مطابقت با کتاب قارچ شناسی پزشکی )امامی( انجام شد . در این مرحله جدایه های قارچی جداسازی و شناسایی مقدماتی شدند توانایی تولید آنزیم لیپاز قارچ ها با محیط کشت اختصاصی تری بوترین آگار بررسی گردید و قارچ های تولید کننده ی آنزیم براساس شعاع هاله هیدولیز شناسایی و انتخاب شدند . در این مرحله 20 جدایه توانایی تولید آنزیم لیپاز را داشتند. پس از انجام استخراج DNA ریبوزومی ) 18 sRNA ( و انجام عمل PCR سنجش کمی آنزیمها به روش اسپکتوفتومتری در طول موج 410 نانومترانجام شد. قارچ پنی سلیوم کرایزوژنوم به علت داشتن بیشترین میزان ترشح آنزیم لیپاز برای شناسایی مولکولی و تعیین توالی به آزمایشگاه میکروژن کره جنوبی ارسال گردید. شناسایی مولکولی نیز انتساب قارچ جدا شده به پنی سیلیوم کرایزوژنوم سویه ی KC884440.1 را تایید نمود. بالا بودن چربی و افزایش آنزیم لیپاز در بدن میتواند عوارضی همچون پانکراتیت داشته باشد. این قارچ تولید کننده ی آنتی بیوتیک پنی سیلین میباشد که از رشد استافیلوکوک ها جلوگیری میکند اما در مباحث قارچ شناسی پزشکی آن را یکی از عوامل عفونت های فرصت طلب در بیمارانی است که دارای سیستم ایمنی ضعیف میباشند نیز معرفی میکنند .با توجه به نتایج تحقیقات آقای نصراللهی در سال 1393 که بیان داشت ژن های کد کننده ی آنزیم لیپاز و ترشح لیپاز یکی از فاکتورهای بیماریزای میکروارگانیسم هاست بررسی شرایط بهینه سازی تولید با دو پارامتر دما و pH انجام شد . دکتر شهلا شادزی در کتاب قارچ شناسی پزشکی)جهاد دانشگاهی اصفهان 1379 ص 328 ( و بخش عفونت های قارچی فرصت طلب در افراد مبتلا به نقص ایمنی مینویسد : چنانچه قارچی بتواند حرارت بدن میزبان مستعد )انسان 37 درجه سانتی گراد( را تحمل نماید و قادر به تولید آنزیم های و توکسینهای لازم جهت تخریب بافت باشد ، می تواند بیماریزا محسوب گردد . در آزمایشات جهت بررسی شرایط بهینه ی تولید آنزیم مشاهده گردید در شرایط تقریبا اسیدی ) pH=6 ( و دمای 37 درجه سانتی گراد این سویه ی قارچی نه تنها توانایی تولید آنزیم را دارد بلکه بهینه ترین شرایط ترشح آنزیم نیز همین شرایط است .