خالص سازی وتعیین خصوصیات سینتیکی آنزیم آسپاراژیناز در باکتری سراشیا مارسسنس

آسپاراژیناز یک آنزیم هیدرولاز می باشد که آسپاراژین را به آمونیوم و آسپارتیت تبدیل می کند. این آنزیم کاربرد موثری در درمان لوسمی لنفوبلاستیک دارد. سراشیا (Serratia (باکتری گرم منفی و متحرکی هست که به خوبی در محیطهای آزمایشگاهی پرورش مییابد.سراشیاها دارای کپسول کوچکی میباشند و کلونیهای آن دارای رنگیزه سفید - صورتی و یا قرمز میباشند معمولا در شرایط اتاق قادر به تولید رنگیزه) رنگیزه (میباشند. رنگیزه قرمز در سطح محیط مولر هینتون بهتر مشاهده میشود. ماده رنگی آن به نام پرودیزوزن یاپیریمین نامیده میشود.ماده رنگی پرودیزوزن که در کلونیهای سراشیا مارسسنس دیده میشود این باکتری را میتوان از عفونتهای ریوی-ادراری و خون جدا کرد.کشت آنها بوی ماهی یا ادرار میدهد.سراشیا مارسسنس (marcescens Serratia (از گونههای معروف آن است و از اهمیت بالایی برخوردار است. این باکتری قادر به تخمیر مالتوز - مانیتول و سوکروز میباشد.سیترات مثبت و اندول - اوره آز - متیل رد وSH 2 منفی است. از خصوصیت پیگمانزایی سراشیا مارسنس به عنوان مارکر ذرات غبار در محیط و در بیمارستان استفاده میشودو تولید پیگمان بهوسیله گرماگذاری در دمای اتاق تشدید میشود. marcescens Serratia یک باکتری گرم منفی است که کلنیهای آن دارای رنگیزه قرمز می باشند که می توانددر صورت حضور آسپاراژین در محیط کشت خود، تولید آنزیم آسپاراژیناز نماید. در این تحقیق آنزیم آسپاراژیناز از محیط کشت Serratia خالص سازی و همچنین فاکتور های کینتیکی آن تعیین شد. باکتری Serratia در محیط مایع حاوی پپتون،عصاره مالت و آسپاراژین کشت شد و محیط بعد از 44 ساعت سانتریفیوژ شد و محلول رویی که دارای آنزیم آسپاراژیناز بود برای مطالعات کینتیکی و خالص سازی مورد استفاده قرار گرفت. مراحل تخلیص آنزیم با استفاده از رسوب دهی با آمونیوم سولفات و به دنبال آن دیالیز و ستون کروماتوگرافی DEAE سلولز انجام شد. انجام الکتروفورز به روش PAGE-SDS باندی با وزن مولکولی تقریبی حدود54 kDa را بر روی ژل نشان داد که نشان دهنده خلوص آنزیم بود. مقایسه تاثیر تغییرات 4-10 (pH (بر فعالیت آنزیم نشان داد که بیشترین فعالیت آنزیم در 7 pH است، و بررسی تغییرات دما بر فعالیت آنزیم نشان داد که بیشترین فعالیت در دمای 40 درجه سانتی گراد می باشد. همچنین مقدار فاکتور های کینتیکی Vmax و Km در این آنزیم مشخص گردید.

کلیدواژه ها:

آنزیم ، آسپاراژیناز ، marcescens Serratia ، فاکتور های کینتیکی ، خالص سازی