جداسازی و کشت اولیه هپاتوسیت های کبد رت با استفاده از آنزیم اکتینیدین میوه کیوی

مقدمه و هدف: برای تجزیه ماتریکس خارج سلولی، جداسازی و کشت اولیه سلول ها، از آنزیم های پروتئولیتیک، بخصوص کلاژنازبرای هضم بافت استفاده می شود. یافتن پروتئاز جایگزین کلاژنازهای باکتریایی یا جانوری در منابع گیاهی که راحتر و کم هزینه ترتخلیص گردد، از اهمیت ویژه ای برخور دار است . در مطالعه حاضر از آنزیم اکتینیدین که به وفور در میوه کیوی یافت می شود،برای جداسازی و کشت هپاتوسیت های کبد موش صحرایی استفاده شد.روش کار: در این مطالعه تجربی آنزیم اکتینیدین پس از تخلیص، در غلظتهای مختلف با روش پرفیوژن یک و دومرحله ای برایجداسازی هپاتوسیت ها از کبد موش صحرایی بکار برده شد . هپاتوسیت های جدا شده در پلیت های کلاژن دار در محیط کشتویلیامز- ای کشت داده شدند . درصد زنده بودن سلول های جداشده با استفاده از آزمون تریپا ن بلو و مورفولوژی سلول ها درمراحل کشت پس از رنگ آمیزی با روش پاپانیکولا بررسی شد.نتایج: اکتینیدین با غلظت 0/4 میلی گرم در میلی لیتر در روش پرفیوژن دومرحله ای توانست بطور مناسب هپاتوسیت ها را از کبد موش جدا نماید . درصد سلول های جدا شده 95-90 درصد تخمین زده شد . سلول ها پس از کشت درپلیت های حاویکلاژن مرفولوژی هپاتوسیت را به وضوح نشان دادند.نتیجه نهایی : این نتایج نشان داد که اکتینیدین پروتئاز مناسبی برای جداسازی هپاتوسیت ها از کبد است . بعلاوه، تخلیص اکتینیدیندر مقایسه با کلاژنازها ساده تر و کم هزینه تر است.

کلیدواژه ها:

اکتینیدین ، کلاژناز ، هپاتوسیت