طراحی آپتامر شناساگرتری نیتروتولوئن (TNT) و بررسی کارایی آن

مقدمه: هدف این کار تحقیقاتی دستیابی به ترادف آپتامری از DNA است که بصورت اختصاصی بتواند تری نیتروتولوئن (TNT) را شناسایی نماید. مواد و رو شها: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و کتابخانه تصادفی از نوکلئوتیدها (با دو ترادف 19 و 21 بازی مشخص جهت اتصال پرایمرها و 78 باز تصادفی در وسط)، تکثیر قطعات نوکلئوتیدی (PCR) انجام گرفت. به منظور انجام SELEX با استفاده از نانوذرات مغناطیسی و ماده واکنشگر EDC، تثبیت TNT صورت پذیرفت. در مراحل آزمایش از ماده TNP-BSA؛ (TNT متصل شده به پروتئین آلبومین) به جای TNT استفاده گردید. پس از غربالگری اولیه، مجدد PCR بر روی قطعات جدا شده از نانوذرات و نوکلئوتیدهای نشاندار با دی اکسیژنین (DIG) تکرار گردید. در ادامه جهت ارزیابی عملکرد آپتامر، به کمک روش ELONA و آنتی بادی اختصاصی بر علیه DIG که کائژوگه به آنزیم پراکسیداز است، کارایی آپتامر در شناسایی TNT مورد مطالعه قرار گرفت. در نهایت نیز ترادف مربوطه در پلاسمید pBluescript کلون و تعیین ترادف گردید. یافته ها و نتیجه گیری: با توجه به نتایج بدست آمده، آپتامر کلون شده دارای کارایی مناسب در شناسایی TNT بوده و می تواند به عنوان آپتاسنسور شناساگر TNT در مطالعات آتی استفاده گردد.

کلیدواژه ها:

آپتامر ، تری نیترو تولوئن ، کلون ، سیلکس ، الونا