تعیین گونه های انگل کریپتوسپوریدیوم انسانی در شهر مهاباد با استفاده از آنالیز 81s rRNA 845 ژن bp قطعه PCR-RFLP

کریپتوسپوریدیوم یک تک یاخته مشترک بین انسان و دام است که به عنوان عامل مهم اسهال آندمیک و اپیدمیک شناخته شده که اغلب کودکان و بیماران دچار نقص سیستم ایمنی بویژه مصرف کننده داروهای سرکوبگر ایمنی سلولار و هومورال را تهدید میکند. مطالعه حاضر با هدف بررسیمیزان شیوع کریپتوسپوریدیوم و ارتباط آن با برخی از متغیرها و تمایز ایزوله های انسانی بر مبنای قطعه 845bp ژن 18s rRNA ، جهت تعیین گونه های شایع این انگل در مهاباد طراحی و اجرا 399 نمونه مدفوع از آزمایشگاههای سطح - - ، شد. در این مطالعه توصیفی مقطعی، طی تیر 39 خرداد 39شهر مهاباد مورد بررسی قرار گرفت. پس ازتغلیظ با روش فرمالین اتیل استات، در ادامه گسترشهای - تهیه شده بروش کاینیون اسید فاست رنگ آمیزی شد، جهت بررسی مولکولی نمونه های مثبتبروشهای گرادیانت منقطع ساکارز و گرادیانت پرکول مورد تخلیص و جداسازی قرار گرفتند در مرحلهبعد DNA ژنومی استخراج و قطعه ژن 18s rRNA جدایه ها با روش Nested-PCR تکثیر گردید،سپس محصول PCR با آنزیم محدود کننده Vsp1 برش داده و تعیین ترداف شد. پردازش اطلاعات با بهره گیری از نرم افزار Excell,v.2013 و v.19 , SPSS انجام پذیرفت. برای تعیین ارتباط بین متغیرها ازآزمون )کای اسکوئر χ2 ( با اطمینان 39 ٪ استفاده شد.از نمونه های رنگ آمیزی شده بروش کاینیون اسید فاست 09 نمونه 1/11 درصد مثبت تشخیص داده شد، آنالیز داده ها نشان داد که اختلاف معنیداری مابین میزان شیوع انگل در گروههای سنی مختلف، محل سکونت مختلف و ابتلا به نقص سیستم ایمنی با افراد عادی وجود داشت) P<0.05 (. همه نمونه های مثبت با روش Nested-PCR تأیید شد. نتایج PCR-RFLP روی ژن 18s rRNA نشان داد که از میان 09 ایزوله مثبت انسانی ، 3 ایزوله دارای ژنوتایپ کریپتوسپوریدیوم پاروم و 0 ایزوله دیگر ژنوتایپ هومنیس بود که حاکی از غالب بودن کریپتوسپوریدیوم پاروم حیوانی در آلودگیهای انسانی بود در حالیکه گونه هومنیس نیز مشاهده شد.

کلیدواژه ها:

کریپتوسپوریدیوم پاروم ، کریپتوسپوریدیوم هومنیس ، شناسایی مولکولی ، ژن 18s rRNA ، Nested-PCR ، مهاباد