بررسی بیان و عملکردآنسیم بتاگلوکاناز نوترکیب بیان شده در باکتریایشرشیاکلی

بتاگلوکاناز یکی از مهمترین آنزیم های مورد استفاده در تغذیه طیور می باشد . با توسعه مهندسی ژنتیک، امروزه از باکتری ها برای تولید پروتئین های انسانی و دامی استفاده می شود . هدف از این تحقیق، بررسی بیان ژن بتاگلوکاناز همسانه سازی شده در ناقل بیانی و سنجش فعالیت آنزیمی و تولید این پروتئین نو ترکیب در باکتری اشرشیاکلی بود تا امکان تولید آن به صورت صنعتی فراهم گردد . جهت بیان پروتئین نو ترکیب مورد نظر، باکتری اشرشیاکلی سویه BL21 حاوی ناقل به محیط کشت LB انتخابی حاوی آنتی بیوتیک آمپی سلین 50 میکروگرم بر میلی لیتر تلقیح گردید . پس از نمونه گیری به عنوان کنترل منفی القاگر IPTG یک میلی مولار به محیط کشت باکتریایی افزوده شد . در زمان های 2،4، 6 ساعت بعد از اقلا نمونه گیری انجام شد . پروتئین کل به روش رسوب گیری از باکتری BL21 استخراج گردید و آشکار سازی پروتئین ها با ستفاده تکنیک SDS-PAGE و رنگ آمیزی کوماسی بر لیانت بلو مورد بررسی قرار گرفت . در تمنونه ها القایی باند قوی پروتئینی در محدوده ی 25 کیلو دالتون نشانگر پروتئینی مشاهده شد در حالیکه در سلول های غیر القایی هیچگونه باندی مشاهده نشد و همچنین نمونه های 2 و 4 ساعت بعد از الق باند قوی تری را نسبت به سایر زمان های القا نشان دادند ، این باند نشان دهنده بیان ژن بتاگلوکاناز در باکتری اشرشیاکلی می باشد . همچنین به منظور سنجش فعالیت آنزیمی بتاگلوکاناز میزان پروتئین فعال و فعالیت ویژه آنزیمی مورد بررسی قرارگرفت .

کلیدواژه ها:

بتاگلوکاناس ، آنشین ، تغذیه طیور ، ایشزشیاکلی