بررسی سیتوژنتیکی و تهیه ی کاریوتیپ از 20 رقم ماش

به منظور بررسی سیتوژنتیکی از دو روش استفاده گردید. در روش اول بذور ماش به روش between paper کشت گردیده و به مدت 24 ساعت در دمای 25 درجهی سانتیگراد در ژرمیناتور قرار داده شدند. بعد از این زمان، بذور از ژرمیناتور خارج گردیده ودر یخچال با دمای 10 درجهی سانتیگراد به مدت 24 ساعت قرار داده شدند. سپس بذور از پتری ها خارج گردیده و جوانه های آن-ها که به 1-1/5 سانتیمتر رسیده بود توسط اسکالپل از بذور جدا شده و در محلول فیکساتیو قرار داده شد. پس از گذشت 16-24ساعت جوانه ها از محلول خارج شده و توسط آب مقطر شسته شده و به مدت 5 دقیقه در محلول هیدرولیز قرار داده شدند. محلولHCI IN به عنوان محلول هیدرولیز کننده استفاده شد. سپس عمل رنگآمیزی با استواورسئین 10 درصد صورت گرفت. رنگ آمیزی به مدت 15 دقیقه بر روی چراغ بنزن انجام شد. برای تهیه ی اسلاید و مشاهده ی مرحله ی پرومتافاز میتوز یک جوانه را باپنس بر روی لام قرار داده و انتهای آن (حدود 1 میلیمتر) را با اسکالپل جدا کرده و سپس یک قطره محلول اسید استیک 45درصد ریخته، لامل را روی آن قرار داده و عمل اسکواش صورت گرفت. اسلایدهای آماده شده زیر میکروسکوپ مشاهده گردید. درروش دوم، از تیمار کلشی سین در مرحله ی قبل از فیکساتیو استفاده شد. تیمار کلشی سین از تشکیل رشته های دوک در تقسیماتمیتوزی سلول جلوگیری کرده و باعث می شود احتمال مشاهده ی مرحله ی پرومتافاز بیشتر باشد. تیمار کلشی سین با دو روشجداگانه، یکی به مدت 2 ساعت در دمای اتاق و دیگری به مدت 5 ساعت در یخچال اعمال گردید. نتایج نشان داد به منظوربررسی سیتوژنتیکی، بهترین روش عدم استفاده از پیش تیمار تشخیص داده شد و به نظر می رسد بهترین کاریوتیپ ها از روشبدون پیش تیمار به دست آمد.

کلیدواژه ها:

ماش ، پرومتافاز ، سیتوژنتیک