بیان و تعیین خصوصیات پروتئین کوتاه شده نوترکیب NMP22مشابه پروتئین طبیعی به عنوان مارکر مناسب جهت تشخیص سرطان مثانه

مقدمه: سرطان مثانه یکی از انواع بدخیمی های مجاری ادراری است که شیوع آن در مردان 4 برابر بیشتر از زنان می باشدو تشخیص زود هنگام آن دردرمان موثر و کنترل بیماری نقش بسزایی دارد. روش های تشخیصی که براساس شناسایی آنتی ژن های محلول رها شده در نمونه ادرار هستند می توانند جایگزین روش های شناسایی تهاجمی شده و همچنین میزان اختصاصیت و حساسیت بالاتری از خود نشان دهند. NMP22 بخشی از پروتئین های اسکلت هسته ای می باشد که پس از آپوپتوز سلول ، به ادرار رها شده و غلظت آن در ادرار افراد مبتلا به سرطان مثانه 20 تا 80 برابر بیشتر از نمونه های افراد سالم می باشد. در این مطالعه پروتئین نو ترکیب NMP22 دارای نواحی آنتی ژنتیک به منظور ایجاد پاسخ ایمنی در مدل حیوانی طراحی، بیان و تخلیص شد. مواد و روش ها: توالی ژنتیکی پروتئین مورد نظر از پایگاه اطلاعاتی Genbank برداشته شد و نواحی اپیتوپی آن براساس مقالات و هم چنین با استفاده از پایگاه های اطلاعاتی پروتئین انتخاب شده و300 اسید آمینه انتخابی برای بیان در میزبان E.coli سویه BL21 بهینه شده و برای سنتز به شرکت Genscript سفارش داده شد. این قطعه در وکتور بیانی pGS21a دارای دنباله هیستیدینی دریافت شد و به باکتری مستعد BL21 انتقال داده شد. پس از بیان، پروتئین مورد نظر برروی ژل SDS-PAGE مورد بررسی قرارگرفت. وسترن بلاتینگ جهت تایید بیان و همچنین الایزا جهت بررسی واکنش با آنتی بادی تجاری انجام شد.یافته ها: پروتئین مورد نظر به خوبی بیان شده و باند61 کیلو دالتونی با استفاده ازSDS-PAGE مشاهده شد در حالیکه نمونه های القا نشده و باکتری بدون پلاسمید فاقد باند در ناحیه مورد نظر بود. وسترن بلاتینگ با استفاده از Anti-his tag بیان پروتئین را تایید کرد. الایزا نیز واکنش اختصاصی آنتی ژن و آنتی بادی تجاری Anti-NMP22 را در مقابل نمونه کنترل منفی نشان داد. نتیجه گیری: پرتئین نوترکیب NMP22 می تواند به عنوان یک کاندید مناسب جهت طراحی ابزار تشخیصی برای سرطان مثانه با استفاده از نمونه ادرار مورد استفاده قرار بگیرد.

کلیدواژه ها:

سرطان مثانه ، پروتئین نوترکیبNMP22