ایجاد دو واریانت از آنزیم EPSP synthase از طریق جهش زایی هدایت شده در موقعیت 96

سال انتشار: 1392
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: فارسی
مشاهده: 600

فایل این مقاله در 5 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

NBCI08_0265

تاریخ نمایه سازی: 29 شهریور 1394

چکیده مقاله:

آنزیم 5- انول پیروویل شیکیمات 3- فسفات سینتاز ( EPSPS ) مرحله ششم مسیر شیکیمات را که برای سنتز اسیدهای آمینه و ترکیبات حلقوی در جلبک ها، قارچ ها، باکتری ها و گیاهان پیشرفته ضروری است کاتالیز می کند. این آنزیم محل اثر علف کش گلایفوسیت می باشد که عمل بازدارندگی خود را از طریق رقابت با فسفو انول پیرووات( PEP ) در محل اتصال آن با این آنزیم اعمال می کند. اسیدهای آمینه متفاوتی در این آنزیم تغییر داده شده اند که هر کدام سطوح مقاومت متفاوتی را نسبت به گلایفوسیت نشان داده اند. یکی از اسیدهای آمینه ای که مورد مطالعه قرار گرفته اند گلایسین 96 می باشد که در جایگاه اتصال PEP به آنزیم قرار دارد. در این مطالعه برای جایگزینی Gly96 با اسیدآمینه های آلانین (A) و والین(V) با استفاده از DNA ژنومی باکتری E.coli K12 ژن AroA مربوط به این آنزیم را با واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) با پرایمرهای اختصاصی دارای جایگاه برش Xba1 و Sma1 تکثیر و در وکتور کلونینگpTZ57R/T همسانه سازی شد. برای ایجاد جهش های مورد نظر در ژن EPSPS از روش جهش زایی هدایت شده استفاده گردید. دراین روش ابتدا با استفاده از پرایمر موتانت و یکی از پرایمرهای اختصاصی ژن(P1) مگا پرایمر ایجاد و در مرحله بعد از مگاپرایمر به عنوان پرایمراختصاصی ژن استفاده و همراه با پرایمر اختصاصی دوم(P2) ، ژن جهش یافته با طول کامل تکثیر شد. ژن های جهش یافته در داخل وکتور pTZ5R/T همسانه سازی شد. ژن های تیپ وحشی و جهش یافته پس از توالی یابی برای تراریزش گیاه برنج در پلاسمید بیانی pPZPY122 همسانه سازی گردید.

نویسندگان

امین عابدی

دانشجوی دکترای بیوتکنولوژی کشاورزی- گیاهی، دانشکده کشاورزی دانشگاه گیلان

محمد مهدی سوهانی

استادیار گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی دانشگاه گیلان

سیدحسن حسنی

استادیار گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی دانشگاه گیلان

مراجع و منابع این مقاله:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
  • هسنمین همابس ببو نکنولوزی جم‌هوری اسلامی ابران _ چهارمین همابس ...
  • Eschenburg, S., Healy, M.L., Priestman, M.A., Lushington, G.H., Schonbrunn, E., ...
  • Hermann, K.M. 1995. The shikimate pathway: early steps in the ...
  • Kuiper, H.A., Kleter, G.A., Noordam, M.Y., 2000. Risks of the ...
  • Meilan, R., Han, K.H., Ma, C., Difazio, S.P., Eaton, J.A., ...
  • Priestman, M.A., Funke, T., Singh, I.M., Crupper, S.S., Schonbrunn, S., ...
  • Schonbrunn, E., Eschenburg, S., Shuttleworth, W.A., Schloss, J.V., Amrhein, N., ...
  • Sun, Y.C., Li, Y., Zhang, H., Yan, H.Q., Dowling, D.N., ...
  • Tyagi, R., Lai, R., Duggleby, R.G., 2004. A new approach ...
  • نمایش کامل مراجع