همسانه سازی و بیان فاکتور رشد فیبروبلاستی- نوترکیب انسانی در باکتری اشریشیا کلی

فاکتور رشد فیبروبلاستی- 10 انسانی (hFGF-10 ) گلیکو پروتئین مونومری است که توسط سلول های فیبروبلاستی در دوره ی جنینی تولید و موجب رشد و تمایز بافت ریه و تشکیل جوانه های دست و پا و رشد جهت دار آن به سمت خارج می شود و در بزرگسالی در ترمیم سلول های آسیب دیده ی ریه و زخم ها نقش ایفاء می کند. فاکتور رشد مزبور، تولید شده، بیشتر و صرفا در آزمایشگاه ها برای تولید بافت ریه استفاده می شود و نوع دارویی آن با نام تجاری رپی فرمین درحال گذراندن مراحل آزمایش های بالینی بر روی حیوانات و انسان می باشد. هدف این تحقیق همسانه سازی و بیان فاکتور رشد فیبروبلاستی- 10نوترکیب انسانی در باکتری اشریشیا کلی بود. بنابراین ژن سنتتیک فاکتور رشد فیبروبلاستی - 10 انسانی همسانه سازی شده در پلاسمید pET-28a(+) با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز استخراج و فراوان سازی شده و سپس در پلاسمیدهای بیانی pET-32a(+) و pET-22b(+) همسانه سازی و به باکتری اشریشیا کلی جهت تولید پروتئین نوترکیب مورد نظر منتقل شد. با این راهکار دو نوع همسان هی نوترکیب شامل pET22b+hFGF10 و pET32a+hFGF10 ساخته شد، که تحت شرایط رشد در دمای 30 و 37 درجه سانتی گراد، القاء بیان در غلظت های نهایی 0/2، 0/5 و 1 میلی مولار القاگر (IPTG) پروتئین نوترکیب موردنظر تولید و مورد تایید قرار گرفت.

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد فیبروبلاستی- 10 انسانی ، ژن سنتتیک ، تولید سیتوپلاسمی ، بافت ریه ، رپی فرمین