کلونینگ و بیان ژن RTB در باکتری E. Coli

ژن مولد سم ریسین Ricin . دارای منشأ گیاهی Ricin به صورت یک هترودایمر بوده و از دو زیر واحد متفاوت تشکیل و به وسیله یک باند دی سولفیدی به همدیگر متصل می شوند. RTA (زیر واحد A ) جزء سمی محسوب شده و با فعالیت گالاکتوزیدازی خود باعث تخریب RNA ریبوزوم ها شده و با این عمل سبب مهار سنتز پروتئین می گردد.RTB قسمت غیر سمی ریسین است که به رسپتور خود در سطح سلول ها متصل شده و سبب ورود RTA به درون سلول می شود. توکسینB (RTB) ریسین یک لکتین اختصاصی برای گالاکتوز بوده که به عنوان یک ادجوانت و حامل برای آنتی ژن ها در واکسن های خوراکی عمل می کند DNA ژنومی گیاه کرچک به روش CTAB تخلیص شد. قطعه 786 جفت بازی ژن RTB با جایگاه های آنزیمی HindIII و SalI j توسط PCR تکثیر و به کلونینگ وکتور همسانه سازی و بعد از جداسازی به وکتور pET28a(+) با جایگاه های آنزیمی NotI و SalI همسانه سازی و به باکتری E.coli سویه( Rosetta (DE3 ترانسفورم شد. RTB کلون شده در وکتور بیابانی pET28a(+) به وسیله ی توالی یابی، PCR و آنالیز آنزیمی همچنین پروتئین تولیدی به وسیله SDS-PAGE مورد تأیید قرار گرفت. بیان ژن RTB با القای IPTG انجام و پروتئین تولید و تخلیص شده توسط وسترن به لات تایید گردید.

کلیدواژه ها:

ریسین ، RTB ، پروتئین نوترکیب ، وسترن بلاتینگ