کلونینگ و بیان خارج سلولی و تعیین خصوصیات آنزیم بتاگلوکوزیداز قارچی در مخمر

هیدرولیز باندهای بتا-دی-گلوکوزیدی را کاتالیز میکند.در این تحقیق بتاگلوکوزیداز قارچ ( EC آنزیم بتا گلوکوزیداز ( 3.2.1.21 آسپرژیلوس نایجر در میزبان پیکیا پاستوریس بیان گردید. ژن بتا گلوکوزیداز با در نظر گرفتن کاربرد کدون ها در مخمر پیکیا AOX که حاوی پروموتورالقایی 1 pPink- HC پاستوریس سنتز شد. برای بیان آنزیم بتا گلوکوزیداز در پیکیا پاستوریس از وکتورخطی شدند. BspTI و ژن مقاومت به آمپی سیلین و ژن سازنده ی آدنین بود استفاده شد. وکتورهای بیانی نوترکیب توسط آنزیم توسط روش الکترو پوریشن سلول های یپیکیا پاستوریس ترنسفورم شدند وبا استفاده از محیط انتخابی مخمرهای ترنسفورم شدهوسنجش میزان فعالیت آنزیم تایید شد.در مرحله ی بعد SDS-PAGE جدا گشتند. بیان خارج سلولی آنزیم بتاگلوکوزیداز توسط Novozyme آنزیم نوترکیب بتاگلوکوزیدازتعیین خصوصیات شده و با آنزیم صنعتی 188 مقایسه گردید.

کلیدواژه ها:

آنزیم ، بتاگلوکوزیداز ، پیکیاپاستوریس ، بیان خارج سلولی