افزایش بیان ژن موقتی در سلولهایCHO با استفاده از افزایش بیان پروتئین انتقال دهنده سرامید

مقدمه: حدود60% از پروتئین های نوترکیب درمانی در سلول های جانوری بیان می شوند. روشهای متنوعی برای بهینه سازی بیان در این سلولها بکار گرفته شده است.هدف: هدف از انجام این مطالعه بررسی کارایی روش مهندسی سلول در افزایش بیان پروتئین های نوترکیب در سلولCHO میباشد.مواد و روشها: ژن کد کننده پروتئین انتقال دهنده سرامید کلون شده و به سلول هایCHO انتقال داده شد. رده سلولی پایدار بیان کننده پروتئین انتقال دهنده سرامید ایجاد شده و الحاق پلاسمید به ژنوم سلول از طریق انجامPCRبر رویDNAژنومی این سلول ها نشان داده شد. بیان پروتئین انتقال دهنده سرامید با روش وسترن بلات تایید شد. وکتور بیان کننده فاکتور فعال کننده پلاسمینوژن بافتی به سلولهایCHO و سلول های مهندسی شده ترانسفکت شد. محیط کشت سلولی 48 ساعت بعد از ترانسفکشن جمع آوری شد و میزان بیانtPA از طریق الایزا اندازه گیری شد.نتایج: تکثیر شدن ژن پروتئین انتقال دهنده سرامید ازDNAژنومی نشان دهنده الحاق پایدار این ژن در ژنوم سلول می باشد. همچنین مشاهده باند مورد نظر در وسترن بلات بیان این پروتئین در سلولCHOرا تایید می کند. میزان بیان فاکتور فعالکننده پلاسمینوژن بافتی در سلول های بیان کننده پروتئین انتقال دهنده سرامید نسبت به سلول های فاقد این ژن به میزان دوبرابر افزایش یافته است. نتایج فوق نشان میدهد که افزایش بیان پروتئین انتقال دهنده سرامید روش موثری برای افزایش بیان ژن گذرا در سلول هایCHOمی باشد.

کلیدواژه ها:

مهندسی سلول ، بهینه سازی بیان ، بیان گذرا ، پروتئین انتقال دهنده سرامید